Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (Laginketa Tresnarik gabe) Protokoloa
Deskribapenak
Kit honek lisi-buffer sistema berezia erabiltzen du animalia-ehunen laginetatik DNA genomikoa azkar askatzeko PCR erreakzioetarako, beraz, bereziki egokia da eskala handiko proba genetikoak egiteko.
Lisi-bufferretik DNA genomikoa askatzeko prozesua 10-30 minututan amaitzen da 65 °C-tan.Ez da beharrezkoa proteina eta RNA kentzea bezalako beste prozesurik, eta askatutako aztarna DNA PCR erreakziorako txantiloi gisa erabil daiteke.
2 × PCR ErrazaTMMix (UNG) dUTP erabiltzen du dTTP-ren ordez 2×PCR Easy-n oinarritutaTMNahastu, eta aldi berean dUTP duen txantiloia degradatu dezakeen UNG entzima (Uracil-N-glycosylase) gehitzen du.PCR erreakzioaren aurretik, UNG entzima urakiloa duen PCR produktua degradatzeko erabiltzen da.UNG entzimak ez du inongo eraginik izango urazilorik ez duen txantiloian, horrela anplifikazioaren espezifikotasuna eta zehaztasuna bermatuz eta eskala handiko proba genetikoetan PCR produktuak kutsatzeko aukera saihestuz.
D-Taq DNA polimerasa Foregenek PCR zuzeneko erreakzioetarako bereziki garatu duen DNA polimerasa da.D-Taq DNA polimerasak tolerantzia handia du PCR erreakzio inhibitzaile ezberdinekiko, eta DNAren arrastoak modu eraginkorrean handitu ditzake hainbat erreakzio-sistema konplexutan, eta anplifikazio-abiadura 2Kb/min irits daiteke, PCR zuzeneko erreakziorako bereziki egokia dena.
Kitaren osagaiak
I. zatia | Buffer AL |
Proteasa aurreko genea | |
6× DNA kargatzeko buffer | |
II. zatia | 2 × PCR ErrazaTMNahasketa (UNG) |
Ezaugarriak eta abantailak
■Ez da denbora behar eta garestia DNA arazketa
■ Laginaren eskaria txikia da, 5 mg-ko animalia-ehun bezain gutxi probatu daitezke.
■ Ez da tratamendu berezirik behar, hala nola ehotzea eta birrintzea, eta funtzionamendua erraza da.
■ PCR sistema optimizatuak PCR espezifikotasun handiagoa eta PCR erreakzio inhibitzaileekiko tolerantzia handiagoa izatea eragiten du.
■ Kutsaduraren aurkako PCR sistema 2×PCR ErrazaTMMix (UNG) PCR produktuek eragindako kutsadura eraginkortasunez ezabatzen du eta anplifikazioaren espezifikotasuna eta zehaztasuna bermatzen ditu.
Kitaren parametroak
Aplikazioa: hainbat animalia ehun.
Laginaren lisisetik askatzen den DNA: PCR txantiloi gisa bakarrik erabiltzen da.
Kita helburu hauetarako erabil daiteke: transgenosiaren identifikazioa, animalien genotipizazioa, etab.
Lan-fluxua
Biltegiratzea eta Iraupena
Kit honen I. zatia 2-8tan gorde behar da℃.
Buffer AL erreaktiboa 12 hilabetez gorde daiteke baldintza lehorrean;2-8an gorde daiteke℃biltegiratze luzeagorako.
Foregene Protease erreaktiboak formula berezia du.Bere jarduera eta egonkortasuna bermatzeko, gorde ezazu 4℃12 hilabetez.
Erreaktiboa 6×DNA Loading Buffer 4an gorde daiteke℃edo -20℃denbora luzez.
Kit honen II zatia -20etan gorde behar da℃.
Erreaktiboa 2×PCR ErrazaTMMix (UNG), maiz erabiltzen bada, 4an ere gorde daiteke℃epe laburreko biltegiratzeko (10 eguneko epean erabili).