Cell Direct RT qPCR Kit-Taqman Direct Cell Lysis Zelula prest Urrats bakarreko qRT-PCR Kits Probe
Deskribapenak
Produktu honek lisi-buffer sistema berezia erabiltzen du hazitako zelulen laginetatik RNA askatzeko RT-qPCR erreakzioetarako, denbora asko eta neketsua den RNA arazte-prozesua kenduz, eta 7 minutu baino ez dira behar den RNA txantiloia lortzeko.
5× RT Mix zuzena eta 2× qPCR Mix-Taqman zuzena inhibitzaileen tolerantzia handia dute eta iraulketa eraginkorra eta anplifikazio espezifikoa egin ditzakete txantiloi gisa neurtu beharreko laginaren lisatua erabiliz.Erreaktiboak Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl ditu2, Erreakzio Buffer, PCR Optimizatzailea eta Egonkortzailea, lisi bufferarekin erabil daitekeena laginak azkar eta erraz detektatzeko, eta sentikortasun, espezifikotasun eta egonkortasun handiko ezaugarriak ditu.
Zehaztapenak
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kitaren osagaiak
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kitaren osagaiak 20μl qPCR Erreakzio Sistema | DRT-01021 | DRT-01022 | Ohar | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Zatia I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Zelula Lisia |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Zatia II | DNA ezabagailua | 80 μl | 400 μl | |
| 5 × RT nahasketa zuzena * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2 × zuzeneko qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX erreferentziako tindaketa | 40 μl | 200 μl | ||
| RNasirik gabeko ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Argibide eskuliburua | 1 pieza | 1 pieza | ||
*:Zelula-lisia, 5 × RT Mix zuzena, 2 × zuzeneko qPCR Mix-Taqman bereizita eros daitezke
Ezaugarriak eta abantailak
■Sinplea eta eraginkorra: Cell Direct RT teknologiarekin, RNA laginak 7 minututan lor daitezke.
■ Laginaren eskaria txikia da, 10 gelaxka bezain baxua proba daiteke.
■ Errendimendu handia: ARNa azkar hauteman dezake 384, 96, 24, 12, 6 putzuko plaketan hazitako zeluletan.
■ DNA Eraser-ek kaleratutako genomak azkar ken ditzake, eta geroko emaitza esperimentaletan eragina asko murrizten du.
■ RT eta qPCR sistema optimizatuak bi urratseko RT-PCR alderantzizko transkripzioa eraginkorragoa eta PCR zehatzagoa bihurtzen du, eta RT-qPCR erreakzio inhibitzaileekiko erresistenteagoa.
Kit aplikazioa
Aplikazio-esparrua: hazitako zelulak.
- Laginaren lisiaren bidez askatzen den RNA: kit honen RT-qPCR txantiloiari bakarrik dagokio.
- Kita helburu hauetarako erabil daiteke: gene-adierazpenaren analisia, siRNA bidezko gene isilarazteko efektua egiaztatzea, sendagaien baheketa, etab.
Biltegiratzea eta Iraupena
Kit honen I. zatia 4an gorde behar da℃;II zatia -20 ℃-tan gorde behar da.
Foregene Protease Plus II 4tan gorde behar da℃, ez izoztu -20 ℃-tan.
Erreaktiboa 2×Zuzeneko qPCR Mix-Taqman -20-tan gorde behar da℃iluntasunean;maiz erabiltzen bada, 4an ere gorde daiteke℃ epe laburreko biltegiratzeko (erabili 10 eguneko epean).
Denbora errealeko PCR lehen diseinuaren printzipioak
Aurrera eta Alderantzizko Primer
Denbora errealeko PCRrako, lehen diseinua oso garrantzitsua da.Primerak PCR anplifikazioaren espezifikotasunarekin eta eraginkortasunarekin lotuta daude, eta printzipio hauei erreferentzia eginez diseinatu daitezke:
- Primer luzera: 18-30bp.
- GC edukia: % 40-60.
- Tm balioa: Primer diseinatzeko softwareak, Primer 5 adibidez, primeraren Tm balioa eman dezake.Goran eta beheran dauden primeren Tm balioak ahalik eta hurbilen egon behar dira.Tm kalkulu-formula ere erabil daiteke: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR egitean, 5 °C-ko primer Tm balioaren azpiko tenperatura hautatzen da, oro har, annealing-tenperatura gisa (dagokion errekuntza-tenperaturaren igoerak PCR erreakzioaren espezifikotasuna areagotu dezake).
- Primerak eta PCR produktuak:
- Diseinuaren hasierako PCR anplifikazio produktuaren luzera hobe da 100-150bp.
- Ahal den neurrian saihestu behar dira txantiloiaren bigarren mailako egitura-eremuan diseinu-inprimaketak.
- Saihestu 2 base osagarri edo gehiago sortzea urez gorako eta beheranzko primeren 3′ muturren artean.
- Primer 3′ terminal-oinarria ezin da egon ondoz ondoko 3 G edo C gehigarrirekin.
- Primerek berek ezin dute egitura osagarririk izan, bestela ilearen egitura bat sortuko da, PCR anplifikazioari eraginez.
- ATCG lehen sekuentzian ahalik eta modu berdinean banatu behar da, eta 3′ oinarri terminala saihestu behar da T gisa.
eranskina1: Cell ZuzenaRT-qPCR Kit osagaiat osagarri paketea
1.Zelulen Lisi Soluzioa
| Zelula Lisiaren Soluzioa | |||
| Kitaren osagaiak (24 putzu lisi sistema / putzu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| ZatiaI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ZatiaII | DNA ezabagailua | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT nahasketa | |
| Kitaren osagaiak (20 μl erreakzio-sistema) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× RT nahasketa zuzena | 800 μl |
| RNasirik gabeko ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR nahasketa | ||
| Kitaren osagaiak (20 μl erreakzio-sistema) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × zuzeneko qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Erreferentzia Tindagai | 40 μl | 200 μl |
| RNasirik gabeko ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Argibide eskuliburuak:
