Zelula guztira RNA isolatzeko kit zelulatik guztizko RNA isolatzeko arazketa kitak
Kitaren deskribapena:
Oso araztua eta kalitate handiko RNA totala hainbat hazkuntzako zeluletatik lor daiteke 11 minututan.
RNasik gabekoa
Giro-tenperaturan funtzionatzen du (15-25 ℃)
DNA-Garbiketa Zutabearekin
RNA etekin handia
Azkar: Amaitu erauzketa 11 minututan
Segurtasuna: bat ere ez Kimiko organikoa
Deskribapena
Kit honek Foregene-k garatutako spin zutabea eta formula erabiltzen ditu, 96, 24, 12 eta 6 putzuko plaketan hazitako zeluletatik garbitasun handiko eta kalitate handiko RNA osoa modu eraginkorrean ateratzeko.
Kitak DNA garbitzeko zutabe eraginkorra eskaintzen du, gainnadantea eta zelula lisatua erraz bereizi, lotu eta DNA genomikoa kendu dezakeena.Eragiketa sinplea eta denbora aurreztea da.
TRNA soilik duen zutabeak RNA modu eraginkorrean lotu dezake formula berezi batekin.Lagin kopuru handia aldi berean prozesatu daiteke.
Kitaren osagaiak
| Kitaren konposizioa | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNasik gabeko ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-bakarrik zutabea | 50 | 200 |
| DNA-Garbiketa Zutabea | 50 | 200 |
| Instrukzioa | 1 | 1 |
* Mesedez, jantzi eskularruak eta hartu babes neurriak funtzionamenduan zehar Buffer cRL1 eta Buffer RW1 gatz kaotropiko narritagarriak dituztelako.
Ezaugarriak eta abantailak
■ Prozesu osoa giro-tenperaturan egiten da (15-25 ℃), izotz-bainurik gabe eta tenperatura baxuko zentrifugaziorik gabe.
■ Kit osoa RNasik gabekoa da, ez dago RNA degradazioaz kezkatu beharrik.
■ DNA garbitzeko zutabeak DNA lotzen du zehazki, kitak DNA genomikoaren kutsadura ken dezan DNasa gehigarririk gehitu gabe.
■ RNA etekin handia: RNA soilik Zutabeak eta formula bakarrak RNA eraginkortasunez araz dezakete.
■ Abiadura azkarra: funtzionatzeko erraza eta 11 minututan osa daiteke.
■ Segurtasuna: ez da erreaktibo organikorik behar.
■ Kalitate handikoa: RNA araztua garbitasun handikoa da, proteinarik eta bestelako ezpurutasunik gabea, eta ondorengo hainbat esperimentu bete ditzake.
Kit aplikazioa
96, 24, 12 eta 6 putzuko plaketan hazten diren zeluletatik RNA osoa erauzteko eta arazteko egokia da.
Lan-fluxua
Diagrama
Cell Total RNA Isolation Kit-aren agarosa gel bateriaren diagramak goiko zelula-kopuru desberdinak tratatu zituen, 20μl bolumen eluzioa, 2μl araztutako RNA totala hartu% 1.
Biltegiratzea eta iraupena
Kita 12 hilabetez gorde daiteke giro-tenperaturan (15-25 ℃) edo 2-8 ℃ denbora luzeagoan (24 hilabete).
Buffer cRL1 4 ℃-tan gorde daiteke hilabetez 2-hidroxi-1-etanetiol gehitu ondoren (aukerakoa).
RNA ez da erauzten edo RNA etekinak baxuak dira
Askotan, errekuperazio-eraginkortasuna eragiten duten hainbat faktore egon ohi dira, hala nola: ehun-laginaren RNA-edukia, funtzionamendu-metodoa, eluzio-bolumena, etab.
1. Funtzionamenduan izotz-bainua edo (4 °C) zentrifugazio kriogenikoa egin zen.
Gomendioa: giro-tenperaturan (15-25 º C) funtzionatzea prozesu osoan zehar, ez izoztu bainu eta zentrifugatu tenperatura baxuetan.
2. Laginak ezegoki kontserbatzea edo gehiegizko laginak biltegiratzeko denbora.
Gomendioa: gorde laginak -80 °C-tan edo izoztu nitrogeno likidoan eta saihestu izozte-desizozte errepikatu erabiltzea;saiatu ehun freskoa edo hazitako zelula erabiltzen RNA erauzketarako.
3. Laginaren lisi nahikoa.
Gomendioa: Ehuna homogeneizatzean, ziurtatu ehuna behar bezain homogeneizatuta dagoela eta ehun-zelulak behar adina zatituta daudela RNA-ren askapena azaltzeko.
4. Elutzailea ez da behar bezala gehitzen.
Gomendioa: berretsi RNaserik gabeko ddH dela2O tantaka gehitzen da arazketa-zutabearen mintzaren erdialdean.
5. Etanol absolutuaren bolumen zuzena ez zen gehitu Buffer RL2 edo Buffer RW2ra.
Gomendioa: Jarraitu argibideak, gehitu etanol absolutuaren bolumen zuzena Buffer RL2 eta Buffer RW2ra eta ondo nahastu kita erabili aurretik.
6. Ehun-laginaren dosia ez da egokia.
Gomendioa: Erabili 10-20 mg ehun edo (1-5) × 106500 μl buffer bakoitzeko zelulak RL1, ehunen gehiegizko erabilerak RNA erauzketa murriztu dezakeelako.
7. Eluzio bolumen desegokia edo eluzio osatugabea.
Gomendioa: arazketa-zutabearen eluzio-bolumena 50-200 μl da;eluzio-efektua egokia ez bada, giro-tenperaturan jartzeko denbora luzatzea gomendatzen da aurrez berotutako RNasarik gabeko ddH gehitu ondoren.2O, adibidez, 5-10 minutuz.
8.Arazte-zutabeak etanol-hondarrak ditu Buffer RW2 garbitu ondoren.
Gomendioa: Buffer RW2 garbitu ondoren etanol-hondakina badago, hodi hutsaren zentrifugazioa 1min, hodi hutsaren zentrifugazio-eragiketa egiteko denbora 2min arte handitu daiteke, edo arazketa-zutabea giro-tenperaturan jar daiteke 5 minutuz hondar-etanola behar bezala kentzeko.
RNA araztua degradatzen da
ARN araztuaren kalitatea laginaren kontserbazioa, RNasaren kutsadura eta manipulazioa bezalako faktoreekin lotuta dago.
1. Ehun-laginak ez dira garaiz gordetzen.
Gomendioa: bildu ondoren ehun-laginak edo zelulak garaiz erabiltzen ez badira, berehala kriokontserba -80 °C-tan edo nitrogeno likidoan.RNA ateratzeko, erabili hartu berri den ehun edo zelula lagin bat, ahal den guztietan.
2. Ehun-laginak behin eta berriz izoztu-desizoztea.
Gomendioa: Ehun-laginak gordetzean, hobe da zati txikitan moztea kontserbatzeko, eta erabiltzean piezaren bat kentzea, lagina behin eta berriz izozte-desizoztea eta RNA-aren degradazioa ekiditeko.
3. RNase sartzen da edo ez botatzeko eskularruak, maskarak etab.
Gomendioa: RNA erauzteko esperimentuak RNA manipulatzeko gela bereizietan egiten dira eta mahaia esperimentua baino lehen garbitzen da.
Erabili botatzeko eskularruak eta maskarak esperimentuan zehar, RNasa sartzeak eragindako RNA degradazioa minimizatzeko.
4. Erreaktiboak RNasarekin kutsatuta daude erabileran.
Gomendioa: ordezkatu animalien RNA totala isolatzeko kit berri batekin erlazionatutako esperimentuetarako.
5. RNA manipulazioan erabiltzen diren zentrifugatzaile-hodiak, puntak eta abar RNasarekin kutsatuta daude.
Gomendioa: RNA erauzketan erabiltzen diren zentrifugatzaile-hodiak, puntak, pipetak eta abar guztiak RNasik gabekoak direla.
Lortutako RNA araztuak beherako esperimentuei eragiten die
Arazketa-zutabearen bidez araztutako RNAk, gatz ioiak badira, proteina-edukia handiegia bada, beherako esperimentuan eragina izango du, hala nola: alderantzizko transkripzioa, Northern Blot et al.
1. Eluitutako RNAak gatz ioien hondarrak ditu.
Gomendioa: Berretsi etanol bolumen zuzena Buffer RW2-ra gehitu dela eta egin 2 arazketa-zutabe garbiketa funtzionatzeko adierazitako abiadura zentrifugoan;gatz-ioi hondarrik badago, utzi arazteko zutabea Buffer RW2-n 5 minutuz giro-tenperaturan eta egin zentrifugazioa gatz-kutsadura ahalik eta gehien kentzeko.
2. Etanol-hondarra elututako RNAn.
Gomendioa: berretsi RW2 tampona garbitu ondoren, egin hodi hutsaren zentrifugazio-eragiketa funtzionatzeko adierazitako zentrifugazio-abiaduran, handitu hodi hutsaren zentrifugazio-eragiketaren denbora 2 minutura arte, oraindik etanol hondarra badago, edo utzi giro-tenperaturan 5 m.
