Sarrera:

RNA, izen zientifikoa azido erribonukleikoa, bere laburdura RiboNucleic Acid-etik dator, gutxienez dozenaka erribonukleotido fosfodiester loturen bidez lotuz sortutako azido nukleiko mota bat da.

RNA aztertzeko premisa kutsadurarik gabeko RNA osoa ateratzea da, eta RNA erauzteko oinarrizko printzipioa gutxi gorabehera honela laburbil daiteke:

1. Lehenik zelulak eten

2. Ondoren ezpuru makromolekularrak kendu (proteinak, lipidoak, DNA, etab.)

3. Azkenik, RNA hauspeatzen da gatzak eta disolbatzaile organikoak kentzen dituen bitartean, eta RNA gehiago araztuz.

Erauzketa metodoaren iragana eta oraina

RNA erauzteko metodoaren lehen belaunaldia Piotr Chomczynski eta amona Nicoletta Sacchik asmatutako TRIzol prezipitazio metodoa da (erabiltzen diren erreaktiboen artean guanidina isotiozianatoa, fenola, kloroformoa, etab.), asmakizun honek RNA erauzketa azkarra eta erraza ahalbidetzen duelako, orduz geroztik RNAren ikerketaren gorakada hasi zenetik.

Geroago, aitonak patente hau saldu zion Invitrogen-i, eta Invitrogen-ek metodo hau munduan sustatu zuen eta oso erabilia den metodo bihurtu zen.

Geroago, Invitrogen erosi zuen Thermo!

Produktu adierazgarria: Invitrogen-en TRIzol erreaktiboa

Hala ere, TRIzol prezipitazio-metodoak RNA-ren prezipitazio eta erauzketa anitz eskatzen ditu, eta erabiltzen diren erreaktiboak toxikoak dira eta denbora luzea behar dute funtzionatzeko.

Hori dela eta, bigarren belaunaldiko zutabe-entzimak arazteko metodoa sortu zen, silize-gelaren mintza erabiliz azido nukleikoen adsortzio-material espezifiko gisa, laginaren RNAren berreskurapena maximizatzeko beste ezpurutasun batzuk kenduz.

Bigarren belaunaldiko metodoak funtzionamendua errazten du errendimendu egonkorrean oinarrituta, arrisku-faktorea murrizten du eta RNA erauzteko eraginkortasuna hobetzen du.

Produktu adierazgarriak: QIAGEN RNeasy eta etxeko produktu gehienak

Hala ere, lehen eta bigarren belaunaldiko metodoek DNasa erabiltzea eskatzen dute DNAren kutsadura kentzeko, eta horrek eragozpen batzuk dakarzkio ondorengo esperimentuetan.Hondar-DNasak alderantzizko transkripzioaren eraginkortasuna murriztuko du eta lehen katearen cDNA sintesia murriztuko du, emaitzen zehaztasunari eraginez.

Beraz, hirugarren belaunaldiko erauzketa-metodoa bigarren belaunaldiaren arabera optimizatzen da.Esperimentuak ez du entzimarik gehitu behar, eta RNA erraz lor daiteke bi zutaberekin soilik.

1. zutabea: DNA garbitzeko zutabea DNA garbitzeko

2. zutabea: RNA soilik Zutabeak RNA xurgatzen eta berreskuratzen du bereziki

Eragiketa sinple batek denbora aurrezteaz gain, beherako esperimentuen funtzionamendua errazten du!

Produktu adierazgarriak: QIAGEN RNeasy Plus etaForegeneRNA arazketa serieko produktuak

（RNeasy Plus）

（ForegenerenaLandare Guztira RNA isolatzeko kit)

Esan isilik!Foregene-ren RNA kit-ak RNase Eraser oso erabilerraza ere aurkezten du, 400μg RNasa gainazal solidoan minutu batean guztiz kendu ditzakeena, giza gorputzari substantzia toxikorik gehitu gabe!

Irudia1: Prozesu operatiboak alderatzeko taula

Foregene-ren produktuek RNA erauzketa bi abestitan osatu dezakete, ez jarri beste batzuk zure esperimentuaren aurrerapenarekin jeloskor!

Irudia2:Eemaitza esperimentalak konparazio taula

Lehenengo belaunaldia (1: TRIzol)

Bigarren belaunaldia (2: QIAGENen RNeasy)

Hirugarren belaunaldia (3: QIAGEN-ren RNeasy plus, 4: Foregene)

Irudia3: qPCR grafikoa (anplifikazio kurba grafikoa)

Lehenengo belaunaldia (berdeak TRIzol - esan nahi du, gorriak TRIzol +)

Bigarren belaunaldia (zeru urdinak QIAGEN RNeasy- esan nahi du, gorriak QIAGEN RNeasy +)

Hirugarren belaunaldia (urdinak QIAGEN RNeasy plus esan nahi du, berdeak Foregene)

(Oharra: qPCR grafikoak "-" adierazten du ez dela DNasa gehitu eta DNAren kutsadura ez dela kendu. Hori dela eta, CT handiagoa da eta emaitza ez da zehatza; "+" adierazten du DNasa gehitu dela eta DNA kutsadura kendu dela, emaitza zehatza da)

Berritze tekniko bakoitzak esan nahi du esperimentuaren funtzionamendua norabide sinpleago eta erabilerrazago batean garatzen ari dela.

Foregene-k ikertzaile zientifiko gehiagori lagundu nahi die denbora eta kostu esperimentalak aurrezten, kalitate handiko emaitza esperimentalak lortzen eta elkarrekin ikerketa zientifikoko lorpen baliotsuagoak sortzen laguntzea.