PCR zuzena azido nukleikorik atera gabe anplifikaziorako animalia edo landare ehunak zuzenean erabiltzen dituen erreakzioa da.Zentzu askotan, PCR zuzenak PCR arruntak bezala funtzionatzen du

Desberdintasun nagusia PCR zuzenean erabiltzen den buffer pertsonalizatua da, lagina zuzenean PCR erreakzioa jasan daiteke azido nukleikoen erauzketarik gabe, baina entzimen tolerantziari eta zuzeneko PCR erreakzioan parte hartzen duen tamponaren bateragarritasunari dagozkion baldintzak daude.

Lagin arruntetan PCR inhibitzaile gehiago edo gutxiago dauden arren, PCR zuzenak oraindik anplifikazio fidagarria lor dezake entzimen eta bufferen eraginez.PCR erreakzio tradizionalak kalitate handiko azido nukleikoa behar du txantiloi gisa, eta horrek PCR erreakzioaren aurrerapen leuna galarazi dezake txantiloiak proteinak eta bestelako ezpurutasunak baditu.Direct PCR gaur egun diagnostiko molekularren alorreko teknologia ezagunenetako bat da.

01 Direct PCR jatorriz animalietarako eta landareetarako erabiltzen zen

PCR zuzenaren lehen aplikazioa animalien eta landareen alorrean da, hala nola arratoi, katu, oilasko, untxi, ardi, behi eta abarretan odola, ehuna eta ilea, landareen hosto eta haziak, etab., genotipatzea, transgenikoak, plasmidoen detekzioa, Gene knockout analisia, DNA iturriaren identifikazioa, espezieen analisia eta beste identifikazio eremu batzuk, SNP aztertzeko.

Eremu hauek ezaugarri komun batzuk dituzte, hau da, xede-genearen edukia nahiko altua da eta azido nukleikoen erauzketa zaila da, beraz, PCR zuzenak denbora aurreztea eta emaitzetan eragin txikia izateaz gain, kostua ere aurreztu dezake.

Patogenoak detektatzeko erabiltzen den zuzeneko PCR azken urteetako kontua da, PCR erreaktiboen fabrikatzaile batzuek ahalegin handia egin dute norabide horretan berrikuntzak egiterakoan.Batez ere, COVID-19 epidemia honetan, horrelako detekzio produktu asko agertu dira merkatuan, hala nola SARS-CoV-2 azido nukleikoen detektatzeko kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) Foregene-k ikertu eta garatu duena, denbora errealeko RT PCR teknologia erabiltzen duena (rRT-PCR) giza azido naso-nukleikoen detekzio kualitatiboan edo SARS-2 azido nukleofatikoan lagin orofagian detektatzeko. s.

Foregene Direct PCR teknologia erabiltzen duten enpresetako bat da, ORF1ab, N, E eta normalak detektatzeko.aldaera leinuak azido nukleikoak giza nasofaringearen edo orofaringearen laginetan, hala nola SARS-CoV-2 B.1.1.7 leinua (Erresuma Batua), B.1.351 leinua (ZA), B.1.617 leinua (IND) eta P.1 leinua (BR).

02  PCR zuzenerako beharrezkoak diren erreaktiboak

Lisatu lagina

Laginaren lisatua zuk zeuk konfiguratu edo erosi dezakezu.Lisatu-marka ezberdinen konposizioaren desberdintasunak lisatzeko gaitasuna desberdina egingo du, eta orduan lisatzeko denbora apur bat desberdina izango da.Esaterako, animalia-ehunen laginak prestatzeko, 30 minutu edo gaueko lisia gomendatzen da, oro har, eta birusentzako lisi-soluzioa 3-10 minutu bitartekoa da.

PCR master mix

Hot-start DNA polimerasa erabiltzea gomendatzen da anplifikazio espezifikoa hobetzeko eta anplifikazio gaitasuna areagotzeko.PCR zuzenaren muina polimerasa oso tolerantea da.

DNAren anplifikazioan eragiten duten laginaren osagaiak kendu edo inhibitzea

Lagina lisatuarekin prozesatu ondoren, proteinak, lipidoak eta beste zelula-hondakin batzuk askatuko dira, substantzia horiek PCR erreakzioa inhibituko dute.Beraz, zuzeneko PCRk dagozkien kentzea edo inhibitzaileak gehitzea eskatzen du faktore horien eragina murrizteko.

03  PCR zuzenaren bost ezagutza punturen bilduma

Lehenik eta behin, Direct PCR teknologia lagin biologiko ezberdinetarako zuzeneko PCR teknologia da.Baldintza tekniko honetan, ez dago azido nukleikoa bereizi eta atera beharrik, zuzenean ehun-lagina objektu gisa erabili eta xede genearen abiarazleak gehitu behar dira PCR erreakzioa egiteko.

Bigarrenik, Direct PCR teknologia ez da DNA txantiloiaren anplifikazio teknologia tradizionala bakarrik, RNA txantiloiaren alderantzizko transkripziorako PCR ere barne hartzen du.

Hirugarrenik, Direct PCR teknologiak ehun laginetan PCR erreakzio kualitatibo arruntak ez ezik, denbora errealeko qPCR erreakzioak ere barne hartzen ditu, eta horrek erreakzio-sistemak atzeko planoaren aurkako fluoreszentzia interferentzia-gaitasun sendoa izatea eta fluoreszentzia endogenoak gaitasun antagonikoa itzaltzen ditu.

Laugarrenik, Direct PCR teknologiaren xede diren laginek azido nukleikoen txantiloiak askatzea besterik ez dute behar, eta ez dituzte PCR erreakzioa oztopatzen duten proteinak, polisakaridoak, gatz ioiak eta abar kentzen.Horrek eskatzen du azido nukleikoko polimerasa eta PCR Mix erreakzio-sisteman erresistentzia eta moldagarritasun bikaina izatea baldintza konplexuetan entzimaren jarduera eta erreplikazioaren zehaztasuna bermatzeko.

Bosgarrenik, Direct PCR teknologiaren xede den ehun-lagina azido nukleikorik aberasteko tratamendurik gabe eta txantiloi-kopurua oso txikia da, eta horrek erreakzio-sistemak sentsibilitate eta anplifikazio-eraginkortasun oso altua izatea eskatzen du.