• facebook
  • linkedin
  • youtube

1: Ordeztu hornidura esperimentalak garaiz

albisteak812 (1) 

Konfiguratu (NTC) kontrol negatiboa eta errepikatu askotan.Laborategian PCR produktuen kutsadura dagoela aurkitu ondoren, ordeztu hornigai esperimental guztiak garaiz.Esaterako: berriro diluitu eta lehengaiak prestatu, pipetaren punta, EP hodia, ddH2O, etab. berriro esterilizatzea, pipeta berri batekin ordezkatu eta aldi baterako beste laborategi batzuk maileguan hartu PCR esperimentuak egiteko.Kutsatutako laborategia aireztatu eta irradiatuko da izpi ultramoreekin PCR produktuaren kutsadura desagerrarazi arte, esperimentuarekin jarraitu aurretik.

2: Luzatu UV esposizio-denbora

albisteak812 (2)

Azpimarratzekoa da DNAren kutsadura kentzeko, ohiko erradiazio ultramorea ohi baino 2 orduz luzatu behar dela.Hala ere, UV irradiazioak DNAren kutsadura zati txikiak (200 bp-tik behera) kentzean duen eragina oraindik ez da ona.

Ultramorearen uhin-luzera (nm) 254/300 nm-koa da, eta nahikoa da 30 minutuz irradiatzea.Kontuan izan behar da UV hondar PCR produktuen kutsadura kentzeko UV aukeratzerakoan, PCR produktuaren luzera eta baseen banaketa produktuaren sekuentzian kontuan hartu behar direla.UV irradiazioa 500 bp-tik gorako zati luzeetarako bakarrik da eraginkorra, eta eragin txikia du zati laburretan.

UV irradiazioan, PCR produktuko pirimidina baseek dimeroak eratuko dituzte.Dimero hauek luzapena amaitu dezakete, baina DNA kateko pirimidina guztiek ezin dituzte dimerorik sortu, eta UV irradiazioak ere dimeroak hautsi ditzake..Dimeroen eraketa-maila UV uhin-luzeraren, pirimidina-dimero motaren eta dimero gunearen ondoan dauden nukleotidoen sekuentziaren araberakoa da.Horregatik, PCR anplifikatutako zatiak txikiak badira, UNG anti-PCR produktuaren kutsadura sistema erabiltzea gomendatzen da.

3: Gehien erabiltzen diren DNAren kutsaduraren garbitzaileak

albisteak812 (3)

Aerosolak erraz sortzen dira pipetak gehitzean, zaila da saihestea, eta azkar finkatuko da.Horregatik, zalantzarik gabe, aukera ona da maiz erabiltzea DNAren kutsaduraren garbigailu bereziak DNAren kutsadura hedatzea saihesteko.

4: Erabili UNG kutsaduraren aurkako sistema

albisteak812 (4)

PCR produktuaren kutsadura kendu ondoren, proba-laborategiak UNG anti-PCR produktuaren kutsadura sistema erabil dezake PCR produktuaren kutsadura saihesteko.Laborategi orokorretan, partizio esperimental sinpleak egin ditzakezu, PCR produktuaren eremua beste eremu batzuetatik zorrozki bereiztu, laborategiko arau eta arau batzuk ezarri eta prestakuntza egokia egin dezakezu PCR produktuaren kutsadura saihesteko.

Gomendioak: arrazoizko PCR laborategi bat ezartzea, PCR ingurune ona mantentzea, PCR operazio-prozedura estandarrak formulatzea eta esperimentatzaileen funtzionamendu-kontzientzia zorrotza lantzea dira PCR esperimentuen kutsadura prebenitzeko edo murrizteko gakoak.


Argitalpenaren ordua: 2021-08-12