SOP Sistema eraikitzea

PCR esperimentua SOP ezartzea esperimentuetako langileen portaera normalizatzeko.

Esperimentatzaileek zorrozki betetzen dituzte funtzionamendu-prozedurak, eta giza faktoreek eragin dezaketen PCR kutsadura minimizatzen dute edo operazioan kutsadura gertatzea saihesten dute.Horrez gain, esperimentatzaileak dagozkion ezagutza eta trebetasun profesionalak izan behar ditu, besteak beste, erlazionatutako ekipoak ustiatzeko trebetasuna, lan-prozesu osoa argitzea, kutsaduraren tratamendu-metodoak eta laborategiko kalitate-kontrol-metodoak menperatzea eta proben emaitzak zuzen interpretatzeko gai izatea.

Eraikuntza Standard PCR Laborategia

PCR laborategia lau eremutan banatzen da printzipioz, hots, erreaktiboak prestatzeko eremua, laginak prozesatzeko eremua, anplifikazio eremua eta anplifikazio produktuaren analisiaren eremua.Lehenengo bi eremuak anplifikazio aurreko eremuak dira, eta azken bi eremuak anplifikazio osteko eremuak.Aurreanplifikazio eremua eta anplifikazio osteko eremua zorrotz bereizi behar dira.Material esperimentalak, erreaktiboak, grabazio-paperak, boligrafoak, garbiketa-materialak, etab.-ek anplifikazio aurreko eremutik anplifikazio osteko eremura bakarrik joan daitezke, hau da, erreaktiboak prestatzeko eremutik, laginak prozesatzeko eremutik, anplifikazio eremutik eta anplifikazio-produktuen analisi-eremutik, eta ez dute alderantzizko norabidean isuri behar.Laborategiko aire-fluxuak anplifikazio aurreko eremutik anplifikazio osteko eremura ere joan behar du, ez alderantzizko norabidean.

Urrats esperimentalak murriztu

Laborategiak PCR detekzioa eta identifikazioa soilik egiten badu, PCR kuantitatibo fluoreszentea erabiltzea gomendatzen da ohiko PCRaren ordez.

Fluoreszentzia kuantitatiboko PCR detektatzeko emaitzak seinale fluoreszenteen bidez bildu eta aztertu daitezke, beraz, ez dago erreakzioaren ondoren elektroforesirako estalkia ireki beharrik, eta horrek erreakzio-produktuen ihesak aerosolak sortzeko eragindako PCR produktuen kutsadura saihesten du.Gel-elektroforesiaren karga-fasean tapoien irekidura kopurua handitzen baduzu, litekeena da aerosol kutsadura gertatzea.PCR kuantitatiboaren aplikazioa sustatzea eta pixkanaka PCR kualitatiboa ordezkatzea gomendatzen da.

Kutsaduraren aurkako UNG sistema onartu

PCRren aurkako UNG produktuak kutsatzeko sistema erabiltzen da PCR erreakziorako.

Sistemak dUTP erabiltzen du dTTPren ordez.PCR erreakzioaren ondoren, PCR produktu guztiak (DNA zatiak) dUTPrekin sartzen dira;PCR erreakzioaren hurrengo txandan, sistemari gehitutako UNG entzima 37 °C-tan inkubatzen da PCR baino 5 minutuz, espezifikoa izan daiteke dUTP duten DNA zati guztiak degradatu eta, ondoren, PCR erreakzioa egin.Honek PCR produktuek eragindako aerosolen kutsadura guztiz kendu dezake.Efektua beheko irudian ageri da:

Oharra: zuzeneko PCR serierako, FJ Biotech-en PCRren aurkako produktuen kutsadura sistemaren serieko produktuak aukeratu ditzakezu.

Iradoki

Eskala handiko genotipaketa probak egiten dituzten laborategietarako, oso gomendagarria da UNG anti-PCR produktuaren kutsadura sistema erabiltzea erreaktiboak probatzeko, zentzuzko laborategiak eraikitzeaz gain.

Oroigarria: sistema hau erabiltzeak ezin du kendu PCR produktuaren kutsadura dagoeneko eragindakoa.Horregatik, UNG sistema dagokion probaren hasieran erabili behar da, eta UNG sistema beti PCR anplifikaziorako erabili behar da, PCR produktuen kutsadura saihesteko.Positibo faltsua.

Forge Biotech-en Direct PCR-UNG sistema erabiltzea gomendatzen da eskala handiko probak egiterakoan, hala nola: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

Landare Seed Direct PCR Kit-UNG;

Animalien ehunen Direct PCR Kit-UNG;

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Foregene-ren kit-serie honek PCR detekzioa azkar eta eskala handian egiteaz gain, PCR produktuen kutsadura eraginkortasunez prebenitzen eta kontrolatzen du.