• facebook
  • linkedin
  • youtube

Beruna

Kodetzen ez den RNA luzea, lncRNA 200 nukleotidotik gorako luzera duen RNA ez-kodetzailea da, oro har 200-100000 nt artekoa.LncRNAk gene-adierazpena erregulatzen du maila epigenetikoan, transkripzio-osteko eta transkripzio-ondoan, eta X kromosomaren isilpenean, genomaren inprimatzean eta kromatina-aldaketan, transkripzioaren aktibazioan, transkripzio-interferentzian, garraio nuklearrean, zelulen zikloaren erregulazioan, zelulen bereizketa-erregulazioan eta dosi-konpentsazio-efektuetan parte hartzen du (dosiaren konpentsazio-efektua) eta gaur egun gizakiaren erregulazio eta prebentzio prozesuarekin erlazionatutako beste gaixotasun garrantzitsu asko daude. biomedikuntzaren alorreko puntu beroak.

01  LncRNA motak eta ezaugarriak

albisteak 723 (1)

lncRNA mota askotan banatzen da bere eraketa iturri ezberdinen arabera, goiko irudian ikusten den bezala.Ezaugarri hauek ditu:

1. lncRNA-ak luzeagoak izan ohi dira, adierazpen dinamikoa eta bereizkuntzan splicing metodo desberdinak dituztenak
2. Kodetze-geneekin alderatuta, lncRNAk adierazpen maila baxuagoa izan ohi du
3. LncRNA gehienek denbora- eta espazio-adierazpenaren espezifikotasun nabaria dute ehunen bereizketa eta garapen prozesuan.
4. Tumoreetan eta beste gaixotasun batzuetan adierazpen ezaugarriak daude
5. LncRNAren kokapen azpizelularrak askotarikoak dira
6. Segidak kontserbazio txikia du, baina funtzioak nolabaiteko kontserbazio-maila du, etab.

02 LncRNA alderantzizko transkripzioari buruzko maiz egiten diren galderak

Zeluletan lncRNA-ren eduki txikia, luzera luzea eta maila handiko egitura dela eta, RNA horrek askotan egitura konplexuak ditu, hala nola zurtoin-begiztak edo ile-ontziak, eta RT-qPCR-k alderantzizko transkripzio arrakastatsu edo eraginkortasun baxuko arazoak izaten ditu.

03 LncRNA alderantzizko transkripzioaren soluzioa

albisteak 723 (2)

Arau zentralean, RNA birusek beren alderantzizko transkriptasa erabiltzen duten prozesuari RNA txantiloi gisa DNA sintetizatzeko deitzen zaio alderantzizko transkripzioa.RNA birusaren alderantzizko transkriptasa erabiltzearen prozesuari cDNA txantiloia in vitro sintetizatzeko alderantzizko transkripzioa deritzo.Alderantzizko transkripzio sisteman sartzen diren elementu nagusiak: RNA txantiloia, alderantzizko transkriptasa, abiarazleak eta beste osagai batzuk.

1.RNA txantiloia

RNA txantiloiak alderantzizko transkripzioan duen eragina bere egituran, garbitasunean eta osotasunean islatzen da.Erauzitako RNAren garbitasuna eta osotasuna zenbat eta handiagoa izan, orduan eta handiagoa izango da alderantzizko transkripzioaren eraginkortasuna eta orduan eta zehatzagoak izango dira ondorengo emaitza kuantitatiboak.Gehien erabiltzen diren RNA erauzteko erreaktiboek araztutako RNAak alkohol eta guanidina gatzen hondakinak ditu askotan, alderantzizko transkriptasa gehienetan eragin inhibitzaile handia dutenak.

2. Alderantzizko transkriptasa

Alderantzizko transkriptasak funtsezko eragina du alderantzizko transkripzio sistema osoan.Laborategi gehienetan erabiltzen den alderantzizko transkriptasarako tenperatura egokia 42 °C-koa da, oro har.Izan ere, goi-mailako RNA egituraren irekierak tenperatura handiagoa eskatzen du, eta alderantzizko transkriptasaren baldintzak handiagoak dira.

3.Primer

Alderantzizko transkripzio-hastapenek gene-hastapen espezifikoak, ausazko abiarazleak eta Oligo dT abiarazleak dira.LncRNA gehienek ez dute poliA isatsik, eta garrantzitsua da ausazko abiarazleak Oligo dT-ekin ondo lotzea.

4.Beste osagaiak

RNA degradatzeko oso erraza denez, alderantzizko transkripzio sisteman osagaiak sartzea minimizatu daiteke, eta horrek RNasaren sarrera eraginkortasunez saihestu eta alderantzizko transkripzioaren aurrerapen egokia bermatu dezake.

ForegenoaRNA txantiloitik lortzen du, alderantzizko transkripzioa qPCRra

Eskoltatu zure lncRNA detekzio osoa

albisteak 723 (3)

Animalia RNA osoa IsolasaldiaKit (gDNA kentzeko zutabearekin)

albisteak 723 (4)

Zelula RNA osoa IsolasaldiaKit (gDNA kentzeko zutabearekin)

albisteak 723 (5)

Lnc-RT HeroTM I (gDNasarekin) (lncRNAren lehen katearen cDNA sintesirako Super Premix)

albisteak 723 (6)

Denbora errealeko PCR EasyTM-SYBR Green I

Aabantailak ofRNA erauzketa:

Kitak hirugarren belaunaldiko RNA erauzteko teknologia erabiltzen du, ez da DNasa erabili beharrik.

11 minutura 96, 24, 12 eta 6 putzuko plaka hazitako zeluletatik, gDNArik gabeko, purutasun handiko eta kalitate handiko zelula RNA osoaren eraginkortasun handiko erauzketa.

LncRNA alderantzizko transkripzioaren abantailak:

LncRNArako bereziki garatutako alderantzizko transkripzio-sistema DNA genomikoaren kutsadura azkar kentzeko.

Alderantzizko transkripzio-sistemak egonkortasun termiko handia du eta oraindik ere alderantzizko transkripzio errendimendu ona du 50 °C-tan.

GC eduki handia eta egitura sekundario konplexua duten txantiloiak eraginkortasun handiz alderantzikatu daitezke.

Abantailakof qPCR:

Hot Start Foregene Taq Polymerasak anplifikazio-eraginkortasun handiagoa du, anplifikazio-sentsibilitate handiagoa eta anplifikazio espezifikotasun handiagoa du.

Real PCR Easy Mix optimizatuak SYBR Green I detekzio-sentsibilitate handiagoa du eta bere fluoreszentzia-intentsitatea antzeko produktuena baino 3-5 aldiz handiagoa da, fluoreszentzia-esperimentu kuantitatibo mota ezberdinen beharrak ase ditzakeena.


Argitalpenaren ordua: 2021-07-23