Zenbat dakizu

Nri buruzazido ukleikoa erauztea

Azido nukleiko araztuaren hasiera eta amaiera

Dena zaila da hasieran, azido nukleiko araztua da gehien

Esperimentu molekularren hasiera, ondorengo esperimentuetarako

Arrakastak edo porrotak eragin erabakigarria du.

Aztarna/ultra-traza UV espektrofotometroa ikertzaile zientifiko askok hobesten dute, azido nukleikoen kontzentrazioa eta proteina eta gatz ioien hondakinak modu errazean, azkar eta ekonomikoan detektatu ditzakeelako.

Denok dakigunez, A260-k azido nukleikoaren xurgapena OD balioa esan nahi du, A280 proteina-kontzentrazioa xurgapena OD balioa esan nahi du, A230 gatz ioi-kontzentrazioa xurgapena OD balioa esan nahi du, beraz, A260-k azido nukleikoen kontzentrazioa bihur dezake, A260/280 proteina-hondarra esan nahi du, A260/230 gatz-ioi-hondarra esan nahi du, baina ikerketa kopuru handi batean oinarritutako arau batean oinarrituta dago.konbentzionala” DNAren eta RNAren garbitasuna azal dezakeela sinesteaneurri batean.Ez da azido nukleikoaren etekina eta purutasuna identifikatzeko estandar bakarra, erreferentzia gisa soilik erabiltzen da, eta ez da "urrezko estandarra".

Thermo Fisher ND-2000 eskuliburuak probaren emaitzen fidagarritasuna azpimarratzen du

Arrazoia da UV espektrofotometro mikro/ultramikro bat erabiliz lortutako emaitzek azido nukleikoaren etekina eta purutasuna soilik islatzen dutela albotik, eta eragin-faktore asko daudela (bide optikoa, laginaren bolumena, laginaren kontzentrazioa, pH balioa, absorbantzia-neurriari eragiten dioten beste ioi batzuk, etab.), neurtutako OD balioa ez da zertan zehatza.Aldi berean, absorbantzia-balioa zehazteko materialaren espezifikotasun falta dela eta, kate bakarreko DNAk, kate bikoitzeko DNAk, RNAk, dNTPek eta proteina batzuek xurgapen gailurrak dituzte 260 nm-ko uhin-luzeran, eta A260-k bakarrik zehaztutako kontzentrazioa ez da zertan benetako DNA edo RNA izan.Kontzentrazioa, eta bere osotasuna eta degradazioa ezin dira epaitu.

Beraz, nola epaitu gure azido nukleiko araztuaren kalitatea?Detekziorako UV mikro/ultramikro espektrofotometroa erabiltzeaz gain, agarosa gelaren elektroforesia bezalako metodoak ere beharrezkoak dira azido nukleikoaren garbitasuna eta osotasuna bisualki bistaratzeko, eta kontzentrazioa neurri batean adierazteko.Modu honetan, hainbat metodoren detekzio emaitzetatik lortutako azido nukleikoaren etekina eta purutasuna sinesgarriak dira.

Taula esperimentalaren konparaketa

H1299 zelulen DNA genomikoa atera zen A konpainiaren DNA erauzteko kitak erabiliz, eta ezpurutasunen kutsadura nabarmena ikusi zen, OD balio handiak eraginez.

(OD neurketaren balioa eta dagokion elektroferograma)

Ebaluazio-indizea

Ba al dago "urrezko estandarrik" azido nukleikoen errendimendurako eta kalitatezko probetarako?

Dakigunez, ez dago metodo sinple, azkar eta merkerik.Espektrofotometroa, gel-elektroforesia edo masa-espektrometria izan, guztiek disoluzioko azido nukleikoaren kontzentrazioa eta purutasuna alderdi ezberdinetatik islatzen dute, eta elkarri erreferentzia eginez epaitu behar dira.

Ebaluazio-indize onena beti dajarraipenaren aplikazio esperimentala.Ez du alderantzizko transkripzioaren eta PCR anplifikazioaren eraginkortasunean eragiten.Anplifikazio-produktu fidagarriak eta Ct balioak lortzea eta sekuentziaren bidez sekuentzia oso bat lortzea azido nukleikoen erauzketa arrakastatsua da.

Laburbilduz, ratio-soilik teoriaren ikuspegia zalantzan jarri behar da "urtean beherako emaitza esperimental onak erauzketa parametro on gisa erabiltzea"ren ikuspegiarekin!

Foregene DNA RNA erauzteko kit gomendatuak DNA/RNA garbitasun handia lortzeko:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/