Nire ustez, detekzio-teknologiaren historiako hainbat asmakizun iraultzaile antigeno-antigorputzaren lotura espezifikoaren printzipioan oinarritutako immunomarkatze-teknologia dira, PCR teknologia eta sekuentziazio-teknologia.Gaur PCR teknologiari buruz hitz egingo dugu.PCR teknologiaren bilakaeraren arabera, jendeak normalean hiru belaunalditan banatzen du PCR teknologia: PCR teknologia arrunta, denbora errealeko PCR kuantitatibo fluoreszentearen teknologia eta PCR teknologia digitala.
CPCR teknika komuna
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Kary Mullis-ek polimerasaren kate-erreakzioa (polimerasaren erreakzioa, PCR) asmatu zuen 1983an. Esaten da neskalaguna gidatzen ari zenean, bat-batean inspirazio-distira bat izan zuela eta PCRren printzipioa (gidatzearen onurak) pentsatu zuela.Kary Mullis Kimikako Nobel Saria eman zioten 1993an. New York Times egunkariak honako hau esan zuen: "Oso originala eta esanguratsua, ia biologia PCR aurreko eta post-PCR aroetan banatuz.
PCRren printzipioa: DNA polimerasaren katalisiaren pean, ama katearen DNA txantiloi gisa erabiltzen da, eta lehen espezifikoa luzapenaren abiapuntu gisa erabiltzen da, eta ama katearen DNA txantiloiaren osagarria den alaba katearen DNA in vitro kopiatzen da desnaturalizazio, annealing, luzapen eta beste urrats batzuen bidez.DNA-sintesia anplifikatzeko in vitro teknologia bat da, zeinak azkar eta zehatz-mehatz anplifikatu dezakeen edozein xede-DNA in vitro.
PCR arruntaren abantailak
1.Metodo klasikoa, nazioarteko eta barneko estandar osoak
2.Tresnen erreaktiboen kostu txikiagoa
3.PCR produktuak biologia molekularreko beste esperimentu batzuetarako berreskura daitezke
Gomendatutako Foregene PCR makina: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Erlazionatutako produktuak: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
PCR arruntaren desabantailak
1.kutsatzeko erraza
2.eragiketa astuna
3.analisi kualitatiboa bakarrik
4.Sentsibilitate ertaina
5.Anplifikazio ez-espezifikoa dago, eta banda ez-espezifikoa xede-bandaren tamaina berekoa denean, ezin da bereizi
Celektroforesi apilarrean oinarritutako PCR
PCR arruntaren gabeziei erantzunez, fabrikatzaile batzuek elektroforesi kapilarren printzipioan oinarritutako tresnak sartu dituzte.PCR anplifikazioaren osteko elektroforesi urratsa kapilarean burutzen da.Sentikortasuna handiagoa da, eta hainbat baseren aldea bereiz daiteke eta anplifikazioa MAERKERek kalkulatu dezake.produktuaren edukia.Desabantaila da oraindik PCR produktua ireki eta tresnan sartu behar dela, eta kutsatzeko arrisku handia dagoela oraindik.
CapilarraEelektroforesia
2. Denbora errealeko PCR kuantitatibo fluoreszentea (Quantitative Real-time PCR, qPCR) teknologiaPCR kuantitatibo fluoreszentea, denbora errealeko PCR ere deitzen zaio, PEk (Perkin Elmer) 1995ean garatutako azido nukleikoko teknologia kuantitatibo berria da. PCR kuantitatibo fluoreszentearen garapenaren historia ABI, Roche eta Bio-Rad bezalako erraldoien arima hunkitzeko borroken historia da.Interesa baduzu, begiratu dezakezu.Teknika hau gaur egun PCR erdi-kuantitatiboko teknikarik helduena eta erabiliena da.
Gomendatutako qPCR makina: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Tindagai fluoreszenteen metodoa (SYBR Green I):SYBR Green I PCR kuantitatiborako DNA lotzeko koloratzailerik erabiliena da, hari bikoitzeko DNArekin ez-espezifikoki lotzen dena.Egoera librean, SYBR Green-ek fluoreszentzia ahula igortzen du, baina behin kate bikoitzeko DNAri lotuta, haren fluoreszentzia 1000 aldiz handitzen da.Hori dela eta, erreakzio batek igortzen duen seinale fluoreszente totala hari bikoitzeko DNAren kantitatearen proportzionala da eta handitu egingo da produktu anplifikatuaren gehikuntzarekin.Tindagaiak kate bikoitzeko DNAri modu ez zehatzean lotzen denez, emaitza positibo faltsuak sor daitezke.
Erlazionatutako produktuak: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Zunda fluoreszenteen metodoa (Taqman teknologia): zeharPCR anplifikazioa, zunda fluoreszente espezifiko bat gehitzen da abiarazte pare batekin aldi berean.Zunda oligonukleotido lineal bat da, talde berritzaile fluoreszente bat eta itzaltzaile fluoreszente talde bat, hurrenez hurren, bi muturretan etiketatuta.Zunda osorik dagoenean, erreportari-taldeak igorritako seinale fluoreszentea kencher-taldeak xurgatzen du, eta detekzioa Ez dago seinale fluoreszenterik;PCR anplifikazioan (luzapen fasean), Taq entzimaren 5'-3' Dicer jarduerak zunda digerituko eta degradatu egingo du, eta, beraz, talde fluoreszente erreportaria eta etengailu fluoreszente taldea banandu daitezen, fluoreszentzia monitorizatzeko sistema Seinale fluoreszentea jaso daiteke, hau da, DNA kate bat anplifikatzen den bakoitzean, fluoreszentzia-seinale fluoreszentearen fluoreszentzia osatzen duen molekula anplifikatzen den bakoitzean. s eta PCR produktuen eraketa.Taqman zunda metodoa detekzio klinikoan gehien erabiltzen den detekzio metodoa da.
Erlazionatutako produktuak: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
qPCRren abantailak
1.Metodo heldua da eta euskarrirako ekipoak eta erreaktiboak osatuta daude
2.Erreaktiboen kostu ertaina
3.erabiltzeko erraza
4.Detekzio-sentsibilitate eta espezifikotasun handia
qPCRren desabantailak
Xede-genearen mutazioak detekzio galdua dakar.
Ezin da zehaztu kontzentrazio baxuko txantiloiaren detekzio-emaitza.
Errore handia dago detekzio kuantitatiborako kurba estandarra erabiltzean.
3. PCR digitala (PCR digitala, dPCR) teknologia
PCR digitala azido nukleikoen molekulen kuantifikazio absoluturako teknika da.qPCRrekin alderatuta, PCR digitalak zuzenean irakur dezake DNA/RNA molekulen kopurua, hau da, hasierako laginaren azido nukleikoen molekulen kuantifikazio absolutua.1999an, Bert Vogelsteinek eta Kenneth W. Kin-zler-ek formalki dPCR kontzeptua proposatu zuten.
2006an, Fluidigm txipetan oinarritutako dPCR tresna komertzial bat ekoizten lehena izan zen.2009an, Life Technologies-ek OpenArray eta QuantStudio 12K Flex dPCR sistemak abiarazi zituen.2013an, Life Technologies-ek QuantStudio 3DdPCR sistema jarri zuen abian, eta dentsitate handiko nanoeskala mikrofluidikoaren txip teknologia erabiltzen du laginak 20.000 banakako zelulatan uniformeki banatzeko.ondo erreakzioan.
2011n, Bio-Rad-ek tantetan oinarritutako QX100 dPCR tresna jarri zuen abian, ur-olioaren teknologia erabiltzen duena lagina 20.000 tanta-ura-oliotan banatzeko, eta tantak analizatzeko tantak aztertzeko.2012an, RainDance-k RainDrop dPCR tresna jarri zuen martxan, presio handiko gasak bultzatuta, erreakzio-sistema estandar bakoitza milioi 1 eta 10 milioi pikolitro-mailako mikro-tanta dituen erreakzio-emultsio batean banatzeko.
Orain arte, PCR digitalak bi fakzio nagusi osatu ditu, txip mota eta tanta mota.Ez dio axola zein motatako PCR digitala, bere oinarrizko printzipioak diluzioa, amaierako PCR eta Poisson banaketa mugatzea dira.Azido nukleikoen txantiloiak dituen PCR erreakzio-sistema estandarra berdin banatzen da hamarnaka mila PCR erreakziotan, txipetan edo mikrotantetan banatzen direnak, erreakzio bakoitzak txantiloi molekula ahalik eta gehien eduki dezan eta molekula bakarreko txantiloiaren PCR erreakzioa egiten da.Fluoreszentzia irakurriz Seinalearen presentzia edo eza zenbatzen da, eta kuantifikazio absolutua Poisson-en banaketa estatistikoa kalibratu ondoren egiten da.
Honako hauek dira erabili ditudan PCR digitalaren hainbat plataformaren ezaugarriak:
1. Bio-Rad QX200 tanta digitala PCR Bio-RadQX200 PCR digitalaren plataforma oso klasikoa da, oinarrizko detekzio-prozesua: 20.000 lagin sortzen ditu tanta-sorgailuak Ur-olioko mikrotantak anplifikatzen dira PCR makina arrunt batean, eta, azkenik, mikro tanta bakoitzaren fluoreszentzia seinalea irakurtzen du mikro tanta irakurgailu batek.Operazioa korapilatsuagoa da, eta kutsadura arriskua ertaina da.
Xinyi TD1 mikro-tanta PCR digitalaXinyi TD1 etxeko PCR plataforma digitala da, oinarrizko detekzio prozesua: tanta-sorgailu baten bidez 30.000-50.000 ur-olio-tanta sortu, PCR tresna arrunt batean anplifikatu eta, azkenik, pasa. Tanta irakurgailuak tanta bakoitzaren seinale fluoreszentea irakurtzen du.Plataforma honetan tantak sortzea eta irakurtzea kutsatzeko arrisku txikia duen txip dedikatu batean egiten dira.
STILLA Naica micro-tanta txiparen PCR digitalaSTILLA Naica PCR plataforma digital nahiko berria da.Oinarrizko detekzio-prozesua hau da: erreakzio-soluzioa txipari gehitu, txipa mikro-tanta sortzeko eta anplifikatzeko sisteman sartu eta 30.000 mikro-tanta sortzea.Zabaldu txipan, eta PCR anplifikazioa osatzen da txipan.Ondoren, anplifikatutako txipa mikro-tanta irakurtzeko analisi sistemara transferitzen da, eta seinale fluoreszentea irakurtzen da argazkiak ateraz.Prozesu osoa txip itxi batean egiten denez, kutsatzeko arriskua txikia da.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D txiparen PCR digitala
ThermoFisher QuantStudio 3D txipetan oinarritutako PCR digitalaren beste plataforma klasiko bat da.Bere oinarrizko detekzio-prozesua hau da: gehitu erreakzio-soluzioa hedagailuan, eta erreakzio-soluzioa uniformeki zabaldu txiparen gainean 20.000 mikroputzu hedagailuaren bidez., jarri txipa PCR makinan anplifikatzeko, eta azkenik txipa irakurgailuan sartu eta argazki bat atera seinale fluoreszentea irakurtzeko.Eragiketa nahiko konplikatua da, eta prozesu osoa txip itxi batean egiten da, eta kutsatzeko arriskua txikia da.
5. JN MEDSYS Clarity txipa PCR digitala
JN MEDSYS Clarity txip motako PCR digital plataforma nahiko berria da.Bere oinarrizko detekzio-prozesua hau da: gehitu erreakzio-soluzioa aplikatzailean, eta erreakzio-soluzioa uniformeki hedatu PCR hodian finkatutako 10.000 PCR hodietan aplikatzailearen bidez.Txip mikroporosoan, erreakzio-soluzioa txiparen ekintza kapilarren bidez sartzen da, eta txipa duen PCR hodia PCR makinan jartzen da anplifikazioa egiteko, eta azkenik txipa irakurlean sartzen da seinale fluoreszentea irakurtzeko argazki bat ateraz.Eragiketa zailagoa da.Kutsadura arriskua txikia da.
PCR plataforma digital bakoitzaren parametroak honela laburbiltzen dira:
PCR digitalaren plataformaren ebaluazio-adierazleak hauek dira: zatitutako unitateen kopurua, kanal fluoreszenteen kopurua, funtzionamenduaren konplexutasuna eta kutsatzeko arriskua.Baina garrantzitsuena detekzio zehaztasuna da.PCR plataforma digitalak ebaluatzeko modu bat PCR plataforma digital anitz erabiltzea da elkar egiaztatzeko, eta beste modu bat balio zehatzak dituzten substantzia estandarrak erabiltzea da.
dPCRren abantailak
1.Kuantifikazio absolutua lortzea
2.Sentsibilitate eta espezifikotasun handiagoa
3.Kopiaren lagin txikiak hauteman ditzake
dPCRren desabantailak1. Ekipo eta erreaktibo garestiak 2. Funtzionamendu konplikatua eta detekzio denbora luzea 3. Detekzio-tarte estua
Gaur egun, PCR teknologiaren hiru belaunaldiek bere abantailak eta desabantailak dituzte, eta bakoitzak bere aplikazio-eremuak ditu, eta ez da harremana belaunaldi batek bestea ordezkatzea.Teknologiaren etengabeko aurrerapenak PCR teknologiari bizitasun berria eman dio, aplikazioen norabide bat bestearen atzetik desblokeatzeko aukera emanez, azido nukleikoen detekzioa erosoagoa eta zehatzagoa bihurtuz.
Iturria: Yuan doktoreak probak egitera eramaten zaitu
Gomendatutako produktuak:
Argitalpenaren ordua: 2022-12-18
