Sarrera:
RNA molekulek elkarreragin handia izan dezakete beste molekula biologiko batzuekin, hala nola proteina, DNA eta RNArekin, eta horrela zeluletan eta organismoetan existitzen dira konplexu makromolekularren moduan.Horien artean, RNA-proteina konplexuak RNAren existentzia eta funtzioa dira.RNA pull-down RNA molekulak bahetzeko eta identifikatzeko metodo klasiko bat da, batez ere lncRNA molekulen proteina elkarreragileak, eta ikertzaile gehienek eta nazioarteko aginpidedun aldizkari akademikoek aitortzen dute.Gaur FORREGENE-k zurekin partekatuko ditu RNA pull-down-aren printzipio esperimentala eta prozesu teknikoa, agian erabil dezakezu
1. RNA pull down teknologiaren printzipio esperimentala:
In vitro transkripzioa eta biotinaz markatutako helburuko lncRNA edo lncRNA zatiak (kontrol positibo eta negatibo gisa erabiltzen diren RNA zatiak barne), eta zelula-estraktuekin inkubatu;Erabili avidinarekin ainguratutako ale magnetikoak RNA-proteina edo RNA-RNA konplexuak biltzeko. Garbiketa sakona egin ondoren, konplexua eluten da.LncRNArekin elkarreragiten duen proteina-helburuko molekula detektatzen baduzu, egin proteina-elektroforesia RNA-pull down produktuan, detektatu xede-proteina zilarrezko tindaketaz eta moztu gela masa-espektrometriarako;halaber, zuzenean egin western blot egiaztapena pull-down produktuan;antzematen bada LncRNArekin elkarreragina duten RNA xede-molekulen kasuan, RNA-pull down produktuak RNA erauzketa jasaten dira eta qRT-PCR detekzio espezifikoa egiten da.
2. RNA pull down teknologia esperimentu prozesua:
3. FOREGENE-ren RNA-k behera egiteko zerbitzu teknikoa:
Zelula-kultura
Zelula totala/nuklearra/plasma-proteina-estraktua prestatzea
RNA pull down esperimentua
SDS-PAGE elektroforesia, zilar orbana
Masa espektrometria eta WB esperimentuak
Txosten esperimentala
4. Kasu esperimentala
Hurrengo irudian FJ Bio-Bio-ren RNA-ren beherakada eta SDS-PAGE elektroforesiaren detekzioaren emaitzak erakusten dira, zeinetan gezi gorriak diferentzia-banda markatzen du:
Sichuan Unibertsitateko Song Xu irakaslearen ikerketa taldeak epe luzeko 15 urteko metaketa pilatu du lncRNA ikerketaren arloan.Foregene Bio eta Song Xu irakaslearen ikerketa taldeak lankidetzan aritu ziren lncRNA-ren RNA pull down teknologia abiarazteko, eta horrek emaitza onak emango dizkizu zure esperimenturako.
Argitalpenaren ordua: 2021-06-11