• facebook
  • linkedin
  • youtube

PCR metodoak eta azido nukleikoen aerosolen kutsadura azido nukleikoen azterketa laborategietan txanpon baten bi aldeak bezalakoak dira.Bakarrik aukeratu dezakegu edukitzea edo ez, baina ezin dugu aukeratu nahi edo gastatu.

kutsadura1

1. DNA kentzailearen baheketa

Azido nukleikoen aerosolen kutsadura espaziala kentzeko, lehenik eta behin beharrezkoa da egoera likidoan azido nukleikoak ken ditzaketen DNA kentzaileak deuseztatzea.Benetan funtzionatzen duten DNA kentzaile asko ez daudelako.Metodo esperimentalerako, mesedez, ikusi: DNA kentzailea ezin da laborategiko "ezkutuko txokoa" izan!

Esperimentu honetan, 100 kopia/μL (CT 31 gutxi gorabehera) ASFV plasmidoaren eta PCR digitalaren bidez kuantifikatutako DNA kentzailearen 100 kopia/μL nahastu ziren bolumen berdinetan, eta gero giro-tenperaturan erreakzionatu zuten 10min, 20min eta 30min hurrenez hurren.Azido nukleikoa atera ondoren, qPCR anplifikazioa egin zen.Plasmidoarekin eta urarekin nahastutako kontrol positiboa konparatu zen.Esperimentua aldi berean amaitu ez denez, emaitzen artean desbideratze jakin bat egon daiteke, baina ez du esperimentuaren amaieran eragiten.Orain arte, DNA kentzeko 10 produktu komertzialak ebaluatu ditut.1., 6. eta 8. zenbakiak soilik produktu plasmidoak modu eraginkorrean degrada ditzakete egoera likidoan.Beste produktu batzuek ez dute ia eraginik.

1. taula Komertzialki eskuragarri dagoen DNA kentzailearen azido nukleikoak kentzeko efektua

kutsadura2

2. Gehien erabiltzen diren desinfektatzaileen DNA kentzeko efektuaren esperimentua

1. Erabili ohi diren desinfektatzaileen baheketa

Laborategietan erabili ohi diren desinfektatzaile mota asko daude: aldehidoak, fenolak, alkoholak, amonio-gatz kuaternarioak, peroxidoak, kloro-prestaketak eta azidoak eta baseak.Desinfektatzaile horien desinfekzio-efektuak mikroorganismoetan guztiz egiaztatu dira esperimentuek, baina ez dago azido nukleikoen degradazio-efektuari buruzko datu esperimental nahikorik.Azido nukleikoen azterketa laborategiek desinfektatzaile bat behar dute, mikroorganismoetan desinfekzio efektu ona izateaz gain, DNA degradatu dezakeena.Proben emaitzek erakusten dute 84 desinfektatzaile eta azido trikloroisozianuriko eta 1 M azido klorhidrikoko bi kloro-prestaketek soilik betetzen dituztela baldintzak.1 M azido klorhidrikoa oso korrosiboa denez, azido nukleikoen azterketa laborategietan kloro-prestaketak hondakinen deuseztapen gisa erabiltzea gomendatzen da.Hala ere, kloro-prestaketak korrosiboak dira metalentzat eta ezin dira erabili tresnen eta ekipoen desinfekziorako.

2. taula Desinfektatzaile mota desberdinen DNA kentzearen ondorioak

kutsadura3

2. Kloro prestakinen gutxieneko kontzentrazio eraginkorra

Kloroan oinarritutako desinfektatzaileek DNA degradatzeko efektu handia dute, baina metalen korrosibotasuna eta narritadura direla eta, zorua, metalezkoak ez diren mahaiak, bustitzeko aholkuak, zentrifugatzaileak eta beste proba-elementuak garbitzeko erabil daitezke.

"Pneumonia koronarioaren epidemia desinfektatzeko jarraibide tekniko berriak"-en arabera: Kutsatzaileak (gaixoen odola, jariaketak eta oka) eskuragarri dagoen kloroa 5g/L-10g/L kloroa duen desinfektatzailea;zoruek, hormek eta objektuen gainazalek erabilgarri dagoen kloroa erabiltzen dute 1g/L kloro desinfektatzailea: arropa, ohe-oheak eta beste ehunak kloro-desinfektatzailean bustitzen dira 0,5 g/L kloro erabilgarriarekin 30 minutuz, eta, ondoren, ohi bezala garbitzen dira.

3. taula Kloro desinfektatzailearen kontzentrazio desberdinen DNA kentzeko efektua

kutsadura4

Proba emaitzek zera erakusten dute: kloro-kontzentrazio eraginkorra 1,2 g/L baino handiagoa edo berdina denean, kloroa duen desinfektatzaileak 100 kopia/μL plasmidoa guztiz degradatu dezake 5 minutuz erabiltzen denean.10 minutuz jarduten denean, 0,6 g/L baino handiagoa edo berdina duten kloro-kontzentrazio eraginkorra duten 84 desinfektatzaileak 100 kopia/μL plasmido guztiz degrada ditzake.

3. Azido nukleikoen aerosolak kutsatutako airea kentzeko esperimentua

Nola garbitu azido nukleikoen aerosolek kutsatutako airea?Pentsamendu gehienak aerosolez kutsatutako ingurune bat sortzea eta gero garbitzea dira, edo kutsatu ondoren azido nukleikoak garbitzea.Niretzat, errepikatu ezin den eta esperimentuaren emaitzak kuantitatiboki aztertu ezin diren esperimentuak ez du zentzurik, beraz, aire desinfektatzaile desinfektatzailerako metodo batzuk hartu nituen maileguan.Ikus "GB27948-2020 Aire desinfektatzaileen baldintza orokorrak" eta "Desinfekzioen zehaztapen teknikoak"

1. Proba materialak

1.1 DNA kentzailea: esperimentu honetan, 1. taulako 6 eta 8 DNA kentzaile komertzialki eskuragarri dauden bi aukeratu ziren.

1.2 Test plasmidoa: laborategiko kutsadura gehienaren CT balioa 30 baino handiagoa izango dela kontuan hartuta, oraingoan erabilitako ASFV genearen plasmidoaren kontzentrazioa 100 kopia/μL ingurukoa da eta PCR CT kuantitatibo fluoreszentea 31,07 ingurukoa da.Gehitu plasmidoa kotoizko kotoiarekin eta lehortu airean.

kutsadura5

1.3 Proba tresna: Bilingkehan KVBOX desinfekzio tresnak, Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd.-k adeitasunez onartzen duen, airea desinfektatzeko errendimendu bikaina du hidrogeno peroxidoaren desinfektatzailearekin, eta esporak eta beste mikroorganismo batzuk modu eraginkorrean hil ditzake.

kutsadura6

1.4 Proba-espazioa: 0,1 metro kubiko inguruko transferentzia-leiho itxia.

2. Proba metodoa

kutsadura7

Desinfekzio-makinan ezarritako desinfektatzaile-kopurua 10 ml da eta kontzentrazioa 100 ml/m3 da, hau da, "GB27948-2020 Aire Desinfektatzaileen Baldintza Orokorrak" baino askoz handiagoa da: aerosol spray desinfektatzailea erabiltzean, desinfektatzaile kopurua ≤10 ml/m3 izan behar da.

kutsadura8
kutsadura10
kutsadura9
kutsadura11

Ihinztaduraren ondoren, 2 orduz zigilatu zen, eta, ondoren, plasmidoarekin flokatua, TErekin eluatu zen, eta plasmidoarekin fumigaziorik gabeko flokatua kontrol gisa ezarri zen.Erabili fluoreszentzia-PCR metodo kuantitatiboa detektatzeko.

4. taula Airearen azido nukleikoa kentzeko proben emaitzak

kutsadura12

3. Proben emaitzak

Plasmidoak egoera likidoan modu eraginkorrean degrada ditzaketen DNA kentzeko bi motak ez dute inolako eraginik airearen azido nukleikoa kentzeko esperimentuan.Irrikitan nago azido nukleikoen aerosolen kutsadura kentzeko aireko azido nukleikoen kutsadura kentzeko erabil daitekeen irtenbide bat aurkitzeko azido nukleikoen saiakuntza laborategietan azido nukleikoen aerosolen kutsaduraren arazoa guztiz konpontzeko, baina oraingoz ez da horrelako produkturik aurkitu.Uste dut etorkizunean errendimendu handiko azido nukleikoen kentzaileak egongo direla, aireko azido nukleikoak kentzeko erabil daitezkeenak.

4. Ilusioei uko egin eta prebentzioan zentratu

Enpresek azido nukleikoak kentzeko produktuez harro harrotu arren, iradokitzen dut azido nukleikoen probetan diharduten lagun gehienek behingoz ilusioei uko diezaietela eta errealitatea aintzat hartzea: oso zaila da azido nukleikoen aerosolek kutsatutako airea kentzea, edo prebentzio-neurri sendo bat hartzea eta Eguneroko zaintza lana!

kutsadura13


Argitalpenaren ordua: 2021-09-10