Kola berreskuratzea hobetzeko aholkuak

1. Laginaren karga handitu elektroforesian.

2. Erabili prestatu berri den elektroforesi buffer.

3. Kola moztean, saiatu kola mozten zerrendarekin bakarrik mozten kola ebaketaren bolumena murrizteko: ez duzu helburu zati gutxiko kolarik behar, bestela berreskuratze-tasa eragingo du.

4. Bi kola zati edo gehiago urtu ondoren, hodi bat erabili bolumena zein handia den eta zutabe berera eraman.

5. Solan gehitzen den disoluzioa apur bat gehiago izan daiteke, eta horrek DNA mintzari lotzeko aproposagoa dena, baina, oro har, ez du 750ul gainditzen.

6. Gela berreskuratzeko gakoa DNA zutabeari lotzea da, zutabeko disoluzioaren gatz-kontzentrazio, azidotasun (karga) eta hidrofobikotasunaren bidez.Hori dela eta, elektroforesi tamponaren pHa altuegia bada, 10ul (pH 5,0, 3mol/L NaAC) gehi dakioke solari;mintzean DNA molekulak hobeto atzemateko, %30 isopropanola gehi daiteke likidoan berotzeko kola disolbatu ondoren.

7. Eluiatzailea gehitu aurretik, utzi zutabea giro-tenperaturan minutu batzuetan (10 minutu inguru) etanola guztiz lurrun dadin.

8. Azkenik, gehitu eluante gutxiago berreskuratzeko bolumena minimizatzeko.Orokorrean, 30-50μl eluentea erabiltzen da eluzioa egiteko (ez da gutxi, bestela ezin izango da mintza busti, eluzioa ez dena);eluzio-tantak mintzaren erdian daude, mintzari loturiko DNA guztiz elusteko.

9. Eluentea gehitu ondoren, 55 graduko ur-bainu batean eluatu daiteke 5 minutuz edo 50 graduko ur-bainu batean jarri 10 minutu baino gehiagoz, edo parafilm batekin zigilatu gau osoan zehar 4 gradutan, eta ondoren zentrifugatu hurrengo egunean berreskuratzeko, efektua ona da.

10.Gehitu zentrifugatutako eluatua berriro adsortzio zutabera eta zentrifugatu berriro.

PCR produktua berreskuratzeko metodo eta prozedura zehatzak

1. Kautxu arruntaren birziklapena

Kola berreskuratu nahi baduzu, hobe da kit bat erabiltzea, erosoa dena eta berreskuratze tasa apur bat handiagoa duena.Benetan eskuz berreskuratu behar baduzu, kola moztu ondoren TEren bolumena 3 aldiz gehi dezakezu.Ur bainu batean urtu ondoren, fenola, fenola/kloroformoa garbi ateratzen dira eta etanola hauspeatzen da.Hori da.

2. DNA berreskuratzea fusio-puntu baxuko geletatik

DNA zatien arazpena Gehitu TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8,0, 0,1 mmol/l EDTA) gelaren bolumenaren berdina, eta jarri 65 °C-ko ur-bainu batean 5 minutuz gela guztiz disolbatzeko.

Giro-tenperaturara eraman ondoren, fenol kopuru berdin bat (TErekin saturatua, TE goiko geruzan zigilatu eta fenolaren beheko geruza kendu zen) gehitu zen, eta nahasketa astiro-astiro nahastu zen (ez da beharrezkoa nahasketarik) eta zentrifugatu zen 12.000 rpm-tan 3 minutuz.Errepikatu 1-2 aldiz.

Hartu gainditzailea, gehitu 0,1 bolumen 3mol/L sodio azetato (pH 5,2) eta 2,5 aldiz etanol absolutu bolumena etanolaren prezipitazioa egiteko.Araztutako DNA TE kopuru egoki batekin disolbatu, edukia neurtu eta erabiltzeko prestatu (helburuko geneen egitura aztertzeko, zunda prestatzeko, etab. erabil daiteke).

3. PCR berreskuratzea anplifikazio espezifikotasun onarekin

PCR anplifikazioaren espezifikotasuna ona bada, PCR produktuaren arazketa eta berreskuratze soila besterik ez da.PCR produktuari 50ug/ml proteinasa K gehi diezaiokezu, 37 gradu 1 orduz, behin atera fenol/kloroformoarekin, behin atera kloroformoarekin eta gainnadantearen 0,1 bolumena gehitu.Sodio azetatoa prezipitazio bidez berreskuratu zen etanol absolutu 2,5 bolumenarekin.

Erlazionatutako produktuak:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/