Landarearen RNA osoa isolatzeko kit RNA totalaren arazketarako kit polisakarido eta polifenol gutxiko landareentzako
Zehaztapenak
50 prestaketa, 200 prestaketa
Kitak Foregene-k garatutako spin-zutabea eta formula erabiltzen ditu, polisakarido eta polifenol-eduki baxuko landare-ehunetatik garbitasun handiko eta kalitate handiko RNA osoa modu eraginkorrean ateratzeko.Polisakarido edo polifenol eduki handia duten landare laginetarako, Plant Total RNA Isolation Plus Kit erabiltzea gomendatzen da RNA erauzketa emaitza hobeak lortzeko.Kitak DNA-garbiketa zutabea eskaintzen du, DNA genomikoa erraz kendu dezakeen gaindikotik eta ehun-lisatutik.RNA soilik duen zutabeak RNA modu eraginkorrean lotu dezake.Kitak lagin kopuru handia prozesatu dezake aldi berean.
Sistema osoak ez du RNasarik, beraz, RNA araztua ez da degradatuko.Buffer PRW1 eta Buffer PRW2 lortutako RNA proteina, DNA, ioi eta konposatu organikoek kutsatuta ez dagoela ziurta dezakete.
Kitaren osagaiak
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNasirik gabeko ddH2O, DNA-garbiketa zutabea |
| RNA-bakarrik zutabea |
| Argibideak |
Ezaugarriak eta abantailak
■ Funtzionamendua giro-tenperaturan (15-25 ℃) prozesu osoan zehar, izotz-bainurik gabe eta tenperatura baxuko zentrifugaziorik gabe.
■ Kit osoa RNasirik gabekoa, ez dago RNA degradazioaz kezkatu beharrik.
■ DNA garbitzeko zutabea DNArekin lotzen da bereziki, kitak DNA genomikoaren kutsadura ken dezan DNasa gehitu gabe.
■ RNA etekin handia: RNA soilik Zutabeak eta formula bakarrak RNA eraginkortasunez araz dezakete.
■ Abiadura azkarra: funtzionatzeko erraza eta 30 minutuko epean osa daiteke.
■ Segurtasuna: ez da erreaktibo organikorik behar.
■ Kalitate handikoa: araztutako RNA zatiak garbitasun handikoak dira, proteinarik eta beste ezpurutasunik gabe, eta beheranzko hainbat aplikazio esperimental bete ditzakete.
Kit aplikazioa
Polisakarido eta polifenol eduki baxuko landare-ehun fresko edo izoztutako landare-ehunetatik (batez ere landare-hosto-ehun freskoetatik) RNA osoa erauzteko eta arazteko egokia da.
Lan-fluxua
Diagrama
Plant Total RNA Isolation Kit Plus-ek 50 mg polisakaridoen eta polifenolen hosto fresko prozesatu zituen, eta % 5 araztutako RNA elektroforesiaren bidez probatu zen.
1: Banana
2: Ginkgo
3: Kotoia
4: Granada
Biltegiratzea eta iraupena
Kita 12 hilabetez gorde daiteke giro-tenperaturan (15-25 ℃) ingurune lehorrean, eta 2-8 ℃ denbora luzeagoan (24 hilabete).
Buffer PSL1 4 ℃-tan gorde daiteke hilabetez 2-hidroxi-1-etanetiol gehitu ondoren (aukerakoa).
Arazoak aztertzeko gida
Aurki ditzakezun arazoen analisia honako hauLandare GuztiraRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Bira-zutabea trabatuta dago
Spin-zutabearen blokeoak RNA-ren etekina murriztea edo RNA lortzeko araztu ezin izatea eragingo du, eta lortutako RNAren kalitatea baxua izango da.
Kausa arrunten analisia:
1. Lagina ez da guztiz hautsi.
Laginaren zatiketa osatugabeak DNA-garbiketa zutabea blokeatu dezake, eta horrek RNAren etekinean eta kalitatean ere eragin dezake.Laginaren zatiketa egiterakoan, nitrogeno likido kopuru nahikoa azkar ehotzea gomendatzen dugu, hala nola, laginen zelulen hormak eta zelulen mintzak ahalik eta gehien apurtzeko.Polifenol polisakaridoen landare-laginetarako, Plant Total RNA Isolation Kit Plus erabiltzea gomendatzen dugu.
2.Aspiratu DNA-garbiketa zutabe isolatu gainnatzailea, aspiratu posible zelula-hondakin pellet.
Aspiratutako zelula-hondakinen pellet-ek RNA-soilik zutabea oztopatu dezake RNA xurgatzeko prozeduretan (ikus prozeduraren 5. urratsa, polisakarido polifenolaren prozeduraren 6. urratsa).Gaingatzaile hori aspiratzerakoan kontuz ibili behar dela gomendatzen dugu zelula-hondakinak aspiratu ez daitezen.
3. Hasierako lagin kopurua handiegia da.
Gehiegizko laginak erabiltzeak Buffer PRL1 edo Buffer PSL1-ek laginaren zatiketa osatugabea edo zelulen lisisa osatu gabea eragingo du, eta, ondorioz, arazketa-zutabea itxiko da arazketa-eragiketetarako.Landare Guztira RNA Isolation Kit-ak hasierako gehienezko 50 mg ditu operatutako lagin baten arazketa bakoitzeko.Polifenol polisakaridoen landare laginetarako, Plant Total RNA Isolation Kit Plus probatzea gomendatzen dugu.
4. Zentrifugatzailearen tenperatura baxuegia da.
RNA osoa isolatzea eta arazteko laginaren ehunaren nitrogeno likidoa apurtzea izan ezik, pauso guztiak giro-tenperaturan egiten dira (20-25 °C).Tenperatura baxuko zentrifugagailu batzuek 20 °C-tik beherako tenperaturak dituzte, eta horrek blokeoak sor ditzake DNA-garbiketa-zutabean eta/edo RNA-soilik zutabean.Hori gertatzen bada, ezarri zentrifugatzailearen tenperatura 20-25 °C-tan eta berotu aldez aurretik lisi-nahasketa eta/edo etanolaren bereizketa gainditzailea 37 °C-tan.
Ez da RNA ateratzen edo RNA etekin baxua da
Berreskuratze-eraginkortasunean eragina duten faktore asko izan ohi dira, hala nola: laginaren RNA edukia, eragiketa-metodoa, eluzio-bolumena, etab.
Arrazoi arrunten analisia honako hau da:
1.Izotz-bainua edo tenperatura baxuko (4°C) zentrifugazioa egin zen operazioan.
Iradokizuna: Prozesu osoan giro-tenperaturan (15-25°C) funtzionatu, ez izotz bainurik egin eta tenperatura baxuko zentrifugazioa.
2.RNA degradatu egin da laginaren kontserbazio desegokiagatik edo lagina epe luzerako kontserbatzeagatik.
Gomendioa: Bildutako laginak azkar izoztu behar dira nitrogeno likidoan, eta gero -80 °C-tan gorde behar dira denbora luzez, saihestu laginak behin eta berriz izoztea eta desizoztea;edo berehala busti laginak RNA egonkortzaile RNAlater disoluzioan (animalien laginak).
3.Laginaren zatiketa eta lisis nahikorik ezak arazteko zutabea blokeatzea dakar.
Iradokizuna: Ehuna ehotzean, ziurtatu ehuna nahikoa ehotuta dagoela eta azkar transferitu aurrez prestatutako Buffer PSL1ra (berretsi β-ME proportzio egokia gehitu dela, ikusi prozeduraren 1. urratsa).
4.Eluentea gaizki gehitu da.
Iradokizuna: Ziurtatu RNase-Free ddH dela2O arazketa-zutabearen mintzaren erdialdera isurtzen da.
5.Etanol absolutuaren bolumen zuzena ez zen Buffer PSL2 edo Buffer PRW2ra gehitu.
Iradokizuna: jarraitu argibideak, gehitu etanol absolutuaren bolumen zuzena Buffer PSL2 eta Buffer PRW2 eta ondo nahastu kita erabili aurretik.
6.Ehun-lagin kopurua desegokia da.
Iradokizuna: Erabili 50 mg ehun Buffer PSL1 500 μl bakoitzeko.Ehun gehiegi erabiltzeak ateratako RNA-kopurua murriztuko du eta ondoriozko RNA-ren purutasuna ere murriztuko da.Gomendatzen dugu hasierako laginaren dosiak 50 mg baino gehiago ez izatea RNA erauzteko eragiketa bakoitzeko.
7. Eluzio bolumen desegokia edo eluzio osatugabea.
Iradokizuna: arazte-zutabearen eluente-bolumena 50-200 μl da;eluzio-efektua egokia ez bada, denbora giro-tenperaturan luzatzea gomendatzen da, aurrez berotutako RNasarik gabeko ddH gehitu ondoren.2O, esate baterako, 5-10min.
8.Arazte-zutabeak etanol-hondarrak ditu Buffer PRW2-rekin garbitu ondoren.
Iradokizuna: Hodi hutsa 1 minutuz zentrifugatzen bada eta Buffer PRW2-n garbitu ondoren oraindik etanola geratzen bada, hodi hutsaren zentrifugazioaren denbora 2 minutura handitu dezakezu, edo arazte-zutabea giro-tenperaturan jarri 5 minutuz, hondar-etanola guztiz kentzeko.
9.Kit-a gaizki erabili zen.
Iradokizuna: polisakarido polifenolikoen landare-laginetarako, baliteke ohiko kitak erabiliz, hala nola Plant Total RNA Isolation Kit-a, agian ezin izatea RNA lagin idealak lortu.Plant Total RNA IsolationKit Plus erabiltzea gomendatzen dizugu, polisakarido polifenolikoen landare-laginetarako bereziki diseinatuta dagoena.Polifenol eta polisakarido landareen laginetatik RNA ateratzeko bereziki garatutako kit bat.
OD260/OD280 balioa baxua da
RNA eluzioa ddH-rekin2O eta espektrofotometroaren irakurketetarako erabiltzen den OD260/OD280 balio baxuak lortzen dira.10 mM Tris-HCl erabiltzea gomendatzen dugu, pH 7,5 (RNasarik gabeko ddH baino2O RNA elutatzeko) OD260/OD280 balio nahiko zuzenak lortzeko, ikus “RNAren kontzentrazio eta arazketa saiakuntzak” 19. orrialdean.
ARN araztua degradatzen da
RNA araztuaren kalitatea laginaren kontserbazioa, RNasaren kutsadura eta manipulazioa bezalako faktoreekin lotuta dago.
Arrazoi arrunten analisia:
1.Ehunen laginak ez ziren bildu ondoren denboran gorde.
Gomendioa: Ehun-laginak bildu ondoren garaiz erabiltzen ez badira, gorde itzazu nitrogeno likidoan tenperatura baxuan edo transferitu -80 °C-ra epe luzerako gordetzeko, nitrogeno likidoan azkar izoztu ondoren, edo berehala murgildu laginak RNA egonkortzaile RNAlater soluzioan (animalien laginak).RNA erauzteko, saiatu bildu berri diren ehun laginak erabiltzen.
2.Ehun laginak behin eta berriz izoztea eta desizoztea.
Iradokizuna: ehun-laginak gordetzean, hobe da zati txikitan moztea, kontserbatzeko, eta haietako zati bat ateratzea erabiltzean, laginak behin eta berriz izozteak eta desizozteak eragindako RNA-ren degradazioa saihesteko.
3.RNasa ebakuntza gelan sartzen da edo erabili gabeko eskularruak, maskarak, etab.
Iradokizuna: RNA erauzteko esperimentuak RNA eragiketa bereizietan egiten dira hobekien, eta laborategiko mahaia garbitu behar da esperimentua baino lehen, eta botatzeko eskularruak eta maskarak eraman behar dira esperimentuan zehar, RNasa sartzeak eragindako RNA degradazioa neurri handienean saihesteko.
4.Erreaktiboa RNasak kutsatzen du erabileran zehar.
Iradokizuna: ordeztu landareen guztizko RNA erauzteko kit-serie berri batekin erlazionatutako esperimentuetarako.
5. RNA manipulatzeko erabiltzen diren zentrifuga-hodiak eta pipeta-puntak RNasarekin kutsatuta daude.
Iradokizuna: Ziurtatu RNA erauzketan erabiltzen diren zentrifuga-hodiak, pipeta-puntak, pipetak eta abar guztiak RNasik gabekoak direla.
Argibide eskuliburuak:
