Denbora errealeko PCR Easyᵀᴹ-Taqman
Kitaren deskribapenak
2X Real PCR ErrazaTMMix-Taqman Real Time PCR Easy-k emandakoaTM-Taqman kit aurrenahasketa sistema berri bat da, denbora errealeko PCR anplifikazio erreakzioetarako zunda fluoreszente espezifikoak erabiltzen dituena, produktuaren espezifikotasuna eta erreakzioaren sentikortasuna asko hobetu ditzakeena.ROX barne-kontroleko koloratzaile gisa eskaintzen da.
2X Benetako PCR ErrazaTMMix-Taqman-ek Foregene-ren Taq DNA Polimerasa abiarazte berezia dauka.Taq entzima arruntekin alderatuta, anplifikazio-eraginkortasun handiko abantailak ditu, anplifikazio espezifikoko gaitasun sendoa eta desegokitze-tasa baxuaren abantailak ditu.Anplifikazio ez-espezifikoa murriztu dezake eta PCRren zehaztasuna hobetu dezake.
Zehaztapenak
Denbora errealeko PCR errazaTM-Taqman | ||||
Kitaren konposizioa (20μl sistema) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2×Benetako PCRErrazaTMNahastu-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×ROX erreferentziako tindagaia | 200 μl | 0,5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
DNasirik gabeko ddH2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Ineraikuntza | 1 | 1 | 1 | 1 |
Ezaugarriak eta abantailak
■ Sinplea: 2X PCR nahasketa errore esperimentala eta funtzionamendu denbora murrizteko
■ Espezifikoak: tapoi optimizatuak eta abiarazte beroko Taq entzimak anplifikazio ez-espezifikoa eta hasierako dimeroen sorrera ekidin ditzake.
■ Sentikortasun handia: txantiloiaren kopia baxuak hauteman ditzake
■ Aldakortasun ona: denbora errealeko PCR kuantitatiboko tresna gehienekin bateragarria
Kit aplikazioa
qPCR azterketa
Lan-fluxua
Grafikoa
Biltegiratzea eta iraupena
Kit hau argitik urrun gorde behar da eta -20 ℃-tan gorde behar da.Maiz erabiltzen bada, 4 ℃-tan ere gorde daiteke denbora laburrean (10 egun).
Anplifikazio seinalerik ez
1.Kitaren Taq DNA Polimerasak bere jarduera galtzen du kitaren biltegiratze desegokiagatik edo iraungitzeagatik.
Gomendioa: berretsi kitaren biltegiratze-baldintzak;gehitu berriro Taq DNA polimerasa kopuru egoki bat PCR sistemara edo erosi denbora errealeko PCR kit berri bat erlazionatutako esperimentuetarako.
2.ADN txantiloian Taq DNA Polimerasaren inhibitzaile asko daude.
Iradokizuna: txantiloia birraztu edo erabilitako txantiloi kopurua murriztu.
3.Mg2+ kontzentrazioa ez da egokia.
Gomendioa: eskaintzen dugun 2× Real PCR Mixaren Mg2+ kontzentrazioa 3,5 mM da.Hala ere, lehen eta txantiloi berezi batzuetarako, Mg2+ kontzentrazioa handiagoa izan daiteke.Hori dela eta, zuzenean MgCl2 gehi dezakezu Mg2+ kontzentrazioa optimizatzeko.Optimizatzeko aldi bakoitzean Mg2+ 0.5mM handitzea gomendatzen da.
4.PCR anplifikazio-baldintzak ez dira egokiak, eta primer-sekuentzia edo kontzentrazioa desegokia da.
Iradokizuna: berretsi abiarazlearen sekuentziaren zuzena eta abiarazlea ez dela degradatu;anplifikazio-seinalea ona ez bada, saiatu erretiro-tenperatura jaisten eta lehen-kontzentrazioa egoki egokitzen.
5. Txantiloi kopurua gutxi edo gehiegi da.
Gomendioa: Egin txantiloiaren linealizazio-gradientearen diluzioa eta hautatu denbora errealeko PCR esperimenturako PCR efektu onena duen txantiloiaren kontzentrazioa.
NTC fluoreszentzia balio handiegia du
1.Erreaktiboen kutsadura funtzionamenduan eragindakoa.
Gomendioa: Ordeztu denbora errealeko PCR esperimentuetarako erreaktibo berriekin.
2.PCR erreakzio-sistema prestatzerakoan kutsadura gertatu da.
Gomendioa: Hartu behar diren babes-neurriak funtzionatzerakoan, hala nola: latexezko eskularruak jantzita, iragazkidun pipeta-punta erabiltzea, etab.
3.Primerak degradatu egiten dira, eta abiarazleak degradatzeak anplifikazio ez-espezifikoa eragingo du.
Iradokizuna: Erabili SDS-PAGE elektroforesia abiarazleak degradatuta dauden ala ez detektatzeko, eta ordeztu lehengai berriekin Denbora errealeko PCR esperimentuetarako.
Primer dimeroa edo anplifikazio ez-espezifikoa
1.Mg2+ kontzentrazioa ez da egokia.
Gomendioa: eskaintzen dugun 2× Real PCR EasyTM Mixaren Mg2+ kontzentrazioa 3,5 mM da.Hala ere, lehen eta txantiloi berezi batzuetarako, Mg2+ kontzentrazioa handiagoa izan daiteke.Hori dela eta, zuzenean MgCl2 gehi dezakezu Mg2+ kontzentrazioa optimizatzeko.Optimizatzeko aldi bakoitzean Mg2+ 0.5mM handitzea gomendatzen da.
2.PCR annealing tenperatura baxuegia da.
Iradokizuna: handitu PCR errekostatzeko tenperatura 1 ℃ edo 2 ℃ bakoitzean.
3.PCR produktua luzeegia da.
Gomendioa: Denbora errealeko PCR produktuaren iraupena 100-150 bp artekoa izan behar du, ez 500 bp baino gehiago.
4.Primerak degradatu egiten dira, eta abiarazleen degradazioak anplifikazio espezifikoa agertzea ekarriko du.
Iradokizuna: Erabili SDS-PAGE elektroforesia abiarazleak degradatuta dauden ala ez detektatzeko, eta ordeztu lehengai berriekin Denbora errealeko PCR esperimentuetarako.
5.PCR sistema desegokia da, edo sistema txikiegia da.
Iradokizuna: PCR erreakzio-sistema txikiegia izateak detekzio-zehaztasuna gutxituko du.Hobe da PCR kuantitatiboko tresnak gomendatutako erreakzio-sistema erabiltzea Real Time PCR esperimentua berriro exekutatzeko.
Balio kuantitatiboen errepikakortasun eskasa
1. Tresna gaizki funtzionatzen ari da.
Iradokizuna: akatsak egon daitezke tresnaren PCR zulo bakoitzaren artean, tenperaturaren kudeaketan edo detekzioan erreproduzigarritasun eskasa eraginez.Mesedez, egiaztatu dagokion tresnaren argibideen arabera.
2.Laginaren garbitasuna ez da ona.
Gomendioa: lagin ezgabeek esperimentuaren erreproduzigarritasun eskasa ekarriko dute, txantiloiaren eta lehengaien purutasuna barne.Hobe da txantiloia birraztea, eta lehengaiak SDS-PAGE bidez garbitzen dira.
3.PCR sistema prestatzeko eta biltegiratzeko denbora luzeegia da.
Iradokizuna: Erabili denbora errealeko PCR sistema PCR esperimenturako prestatu eta berehala, eta ez utzi denbora luzez alde batera utzita.
4.PCR anplifikazio-baldintzak ez dira egokiak, eta primer-sekuentzia edo kontzentrazioa desegokia da.
Iradokizuna: berretsi abiarazlearen sekuentziaren zuzena eta abiarazlea ez dela degradatu;anplifikazio-seinalea ona ez bada, saiatu erretiro-tenperatura jaisten eta lehen-kontzentrazioa egoki egokitzen.
5.PCR sistema desegokia da, edo sistema txikiegia da.
Iradokizuna: PCR erreakzio-sistema txikiegia izateak detekzio-zehaztasuna gutxituko du.Hobe da PCR kuantitatiboko tresnak gomendatutako erreakzio-sistema erabiltzea Real Time PCR esperimentua berriro exekutatzeko.