Laborategiko probak laginak biltzearekin hasten dira, eta laginak biltzea da errazena ahaztu.Laginak biltzeko gauzarik garrantzitsuena lagin mota egokia hautatzea, laginketa-tresna egokiak erabiltzea eta arrazoizko garraioa eta prozesatzea da.

I.Lagin mota

Ohiko lagin motak hauek dira:

Laginketa-metodoak nekazaritza-merkataritzako (bazaar) merkatuan koronavirus berriaren ingurumen-zaintzarako zehaztapen teknikoetara jo dezake:

1. Eztarriko laginak, eskuak, arropak eta praktikatzaileen beste objektu batzuetatik ateratako laginak: birusen laginketa-hodian birusen kontserbazio-soluzioa erabili behar da eta laginketa-kotoizko laginetan guztiz infiltratu behar da.Lurraren gainazala behin eta berriz aplikatzen da eta 3 aldiz baino gehiagotan garbitzen da.Aldi berean, beharrezkoa da puntu anitzeko laginketa banatua egitea lagindako objektuaren gainazalean.

2. Elikagaien gainazaleko laginak: Elikagaien laginak ezin dira zuzenean jaso.Biltzeko elikagaiak arretaz bereizi eta laginketa-poltsa garbi batean gorde behar dira laginak bildu aurretik.Birusak kontserbatzeko soluzioa birusaren laginketa-hodian erabili behar da, laginketa-kotoi-zipua guztiz busti ondoren, bilduko den elikagaien laginaren gainazala behin eta berriz lohitu eta garbitzeko 3 aldiz baino gehiagotan.Aldi berean, beharrezkoa da laginaren gainazalean puntu anitzeko laginketa banatua egitea.

3. Ur zikinen laginak: Merkatuan drainatze-sistemaren banaketaren arabera, hautatu 2-3 ur zikinen laginketa-lekuak, barne-hodi-sarearen bilketan arreta jarriz, ur-fluxuaren noranzkoaren beheranzko norabidean edo udal-hodien sarearekiko konexioan.Lagin bat jasotzeko, murgildu ur zikinetan laginketa-kotoi batekin, ur zikinak xurgatzeko eta laginketa-hodian garbitu 3 aldiz baino gehiagotan.Ur zikinen laginak biltzeko, erabili polietilenozko plastikozko botilak 30-500 ml-ko ur zikinen laginak biltzeko;500 ml-tik gorako bolumena duten ur zikinak biltzeko, polietilenozko plastikozko ontziak edo ur-laginak aberasteko ekipamendu bereziak erabil daitezke.Aldi berean, beharrezkoa da puntu anitzeko laginketa banatua egitea ur zikinen laginketa tokirako.

4. Animalien laginak: animalia biziei dagokienez, gorputz-azalerazko laginak, orofaringe-laginak eta anal-laginak biltzeko erabil daitezke, eta gorotz- edo jariatze-laginak ere jaso eta horren arabera erregistratu daitezke erregistro-orrian.Larruazala eta abar jasan duten animalien laginetarako, erabili kotoizko laginak haien gorputz-azalera eta gorputz-barrunbeko laginak biltzeko.Birusak kontserbatzeko soluzioa erabili behar da birusen laginketa-hodian laginketa-kotoi-zipuan guztiz infiltratzeko, eta, ondoren, jaso beharreko elikagaien laginaren gainazalaren aplikazioa errepikatu behar da.Shabu 3 aldiz baino gehiago.Aldi berean, beharrezkoa da laginaren gainazalean puntu anitzeko laginketa banatua egitea.

5. Beste aparatu batzuk: animaliak garraiatu eta hazteko ontziak, hala nola kaiolak edo arraindegiak.Lehenik eta behin, behatu edo ulertu ontzian gordetako eta hazitako animalia mota espezifikoak, eta bildu laginak ontziaren barruko horman edo edukiaren lagin likidoetan.

6.Bildu aerosol-laginak jendea biltzen den guneetan, tokiko merkataritza-guneetan, bulegoetan eta atsedenleku gutxi aireztatuta.

II.Laginketa-tresnak
1. Odola biltzeko hodia
Geroago azido nukleikoen probak eta antikoagulatzaileen laginak egin behar badituzu, gomendatzen da odola biltzeko EDTA antikoagulatzailea duen hutseko odol-ontzi bat erabiltzea;serum laginetarako, antikoagulatzailerik gabeko hutseko odol-hodi bat erabiltzea gomendatzen da.

2. Laginketa laginak

Gomendagarria da kaltzio-alginatoa edo egurrezko zutoinen ordez polipropilenozko zapiak erabiltzea, zenbait birus desaktibatu eta PCR probak galarazten dituzten substantziak izan ditzaketelako.Ezin dira kotoizko buruak dituzten zurbilak erabili, kotoi-zuntzek proteina xurgapen handia baitute eta ez direlako erraz elutzen ondorengo kontserbazio-soluziora.

Coronavirus azido nukleiko berrien bilketa eta detekzio mistoen 10-en-1en zehaztapen teknikoetan, argi eta garbi zehazten da: "laginketa-zipua poliesterrezko, nylonezko eta kotoizko eta kaltziozko alginatozko beste materialez egin behar da, eta heldulekua egurrezkoa ez den materialaz egin behar da.Haustura-puntua 3 cm ingurukoa da lapitxoaren buruaren goialdetik, eta hori erraza da hausteko.

Estatu Batuetako CDCk ere aipatu zuen: "Erabili plastikozko edo alanbre-ardatzekin zuntz sintetikoko zapiak soilik.Ez erabili kaltzio-alginatozko lastokiak edo egurrezko ardatzekin,birus batzuk desaktibatzen dituzten eta PCR probak galarazten dituzten substantziak izan ditzaketelako.

Gaur egun asko erabiltzen da plastikozko hagaxka batekin konbinatutako nylonezko poligono esterila botatzeko.Flocking swab-ek ura xurgatzeko eta askatzeko tasa hobea du.Laginketa gune ezberdinen arabera, laginaren buruak ere tamaina eta zuntz desberdinak ditu.Lodiera.”

3. Lagina garraioa kontserbatzeko irtenbidea

Birusaren inaktibazioa kontserbatzeko irtenbidea: guanidina gatz kontzentrazio kopuru egoki batek eta birusaren lisiaren osagai ugarik zuzenean lisa dezakete birusa azido nukleikoa askatzeko, RNasa eta DNasa desaktibatzeko eta azido nukleikoaren osotasuna bermatzeko, ondorengo qPCR detektatzeko erabil daitekeena.Ezin da birusak hazteko eta isolatzeko erabili.

Birusak garraiatzeko eta kontserbatzeko irtenbidea: birusaren biziraupenerako beharrezkoak diren gatzak, aminoazidoak, bitaminak, glukosa eta proteinak ditu, eta horrek birusaren jarduera mantendu dezake.Etorkizunean azido nukleikoak erauzteko eta birusa detektatzeko erabil daiteke, eta birusa landatzeko eta bereizteko ere erabil daiteke.

4. Laginak kontserbatzeko hodia eta lagin poltsa

Laginak biltegiratzeko hodiak plastikozko hodi esterila izan behar du, azido nukleikorik xurgatzen ez duen torlojuzko tapoi batekin.Lagin-hodi bakoitza lagin-poltsa batekin estali behar da laginaren ihesak eta kutsadura saihesteko.

III.Substantzia interferenteak laginean

Substantzia interferenteak PCR esperimentuetan

1. interferente endogenoa

Gorputzaren laginean dauden substantziek beste substantzia batzuen detekzioa oztopatu dezakete.

Odola:heme (>1mg/ml), hemina (>0,1ng/μl), triglizeridoak, IgG, etab.;

Gernua:urea (20mM);

Taburetea:landare polisakaridoak, kolatoa;

Ehuna:proteasa, kolagenoa;

Esne: proteasa, kaltzio ioia;

Drogak: antibiotikoak, birusen aurkako sendagaiak, hormonak, etab.

beste.

2. interferente exogenoa

In vitro beste substantzia batzuen detekzioa oztopatu dezaketen substantzietatik dator.Laginak biltzeko eta prozesatzeko garaian kontaktuan jar daitezkeen lagin-gehigarriak eta substantziak:

Probarako hornigaiak: seruma bereizteko gela, laginak biltzeko ontzia eta gomazko tapoia, kateterra, kateteraren garbiketa-likidoa, eskularru-hautsa, etab.

Antikoagulatzailea: heparina (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), etab.;

Disolbatzaile organikoak: isopropanola (>0,1 IU/ml), betaina, dimetil sulfoxidoa, formamida, glizerina, PEG, etab.;

Desinfektatzaileak: alkoholak (etanola>% 1), aldehidoak, fenolak (fenola>% 0,2), peroxidoak, azido sendoak (HCL), alkali sendoak (NaOH), etab.;

Detergentea:SDS (>% 0,005);

Lurzorua: Humusa

Koloratzailea: Indigo

beste.

Kanpoko benetako laginketa baldintzetan, hala nola ingurumen-laginak biltzean, laginek hainbat interferentzia-substantzia izan ditzakete, eta interferentzia-substantziaren konposizioa desberdina da toki bakoitzean, eta horrek PCR interferentzia-esperimentuak tokiko baldintzen arabera egin behar dira.

IV.Laginak biltegiratzeko eta garraiatzeko baldintzak

Bildu berri diren lagin klinikoak laborategira bidali behar dira 2 eta 4 ordu arteko epean, 2°C eta 8°C artean.Gorde 4 ℃-tan 24 orduko epean.Birusak isolatzeko eta azido nukleikoa detektatzeko erabilitako aleak ahalik eta azkarren probatu behar dira.24 orduko epean probatu daitezkeen aleak 4 °C-tan gorde daitezke;24 ordutan detektatu ezin diren aleak -70 °C-tan edo beherago gorde behar dira (hala ez bada- 70 °C-tan gorde hozkailuan -20 °C-tan).

Laburpen:Laginak biltzea, garraiatzea eta biltegiratzea normalizatua ezinbestekoa da ondorengo probak egiteko.Laborategiko proba askoren negatibo faltsuak azido nukleiko birikoaren degradazioa eragiten duten laginak behar bezala bildu, garraiatu eta biltegiratuta daude.Hala ere, laborategi askok oraindik ez diote jaramonik egiten laginketaren garrantzia.Espero dut artikulu honek guztion arreta piztea laginketari buruz eta laginketa zientifiko eta zentzuzkoagoa egitea!

Erlazionatutako produktua:

SARS-CoV-2 aldaera azido nukleikoa detektatzeko kit (I) (Multiplex PCR fluoreszente zunda metodoa) - Brasil, Hegoafrika eta Erresuma Batuko mutanteak detektatzeko