Egileak: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unitatea: Jiaozhou Ospitalea, Dongfang Ospitalea Tongji Unibertsitateari afiliatua

Gaur egun, arnas patogenoen azido nukleikoa detektatzeko lagin mota nagusia eztarria da.Laginak kontserbatzeko erabili ohi diren soluzio mota asko daude, eta horiek guztiak hoztu edo izoztu behar dira garraiatzeko eta biltegiratzeko;Zaila da tenperatura baxuko prozesu osoa kontrolatzea bilketa eta garraio prozesuan zehar, eta zaila da laginak probatu aurretik kalitate kontrola ziurtatzea.^[1-2].

RNasa (RNase) RNA hidrolizatzen duen endonukleasa da, batez ere nukleotidoen arteko fosfodiester loturak hausten dituena.RNasa molekula oso egonkorra da, egituran disulfuro-loturak daude eta bere jarduerak ez du katioi dibalenteen presentzia behar, beraz, RNasa ez da erraz desnaturalizatzen, eta tenperatura altua edo desnaturalatzaileak erabilita ere erraza da birnaturalizatzea.RNasak endogeno eta exogenoetan banatzen dira.RNasa endogenoak zelulak hausten direnean aldi berean askatu daitezke.Hori dela eta, RNasen endogenoen papera ezabatzea oso urrats kritikoa da RNA erauzteko prozesuan.RNasak exogenoak oso hedatuta daude.RNasak airean, gizakien larruazalean, ilean eta listuan daude, eta horiek RNA erraz degradatzeko arrazoi garrantzitsuak dira.^[3].

Datuen kontsulta

CANS-CL02-A009 "Diagnostiko Molekularraren Arloan Laborategi Medikoen Kalitatea eta Konpetentzia Egiaztatzeko Gidalerroen Aplikazioa" eskakizun teknikoetan uraren kalitate-arau egokiak aplikazioaren arabera formulatu behar direla proposatzen du;Bota eta botatzeko ontziak:

RNasa / Sailkapena

(1) RNasa A

A erribonukleasa (RNasa A), behi pankreatik eratorria, endoribonukleasa bat da, ARNaren pirimidin-hondakinen 3′ amaieran bereziki eraso dezakeena, ondoko nukleotidoek osatutako zitosina edo uraziloa moztuz.Fosfodiester lotura, erreakzioaren azken produktua 3′ pirimidina nukleotidoa eta amaieran 3′ pirimidina nukleotidoa duen oligonukleotido bat da.

(2) RNasa T1

Erribonukleasa T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae-tik eratorria da, guaninaren 3′-terminalaren fosfatoan jarduten du bereziki, eta zatiketa gunea guaninaren 3′ fosfatoaren eta ondoko nukleotidoen 5′ hidroxiloaren artean dago.Erreakzioaren azken produktua 3′ azido guanilikoa eta amaieran 3′ azido guanilikoa duten oligonukleotido zatiak dira.

(3) RNasa H

Erribonukleasa H (RNase H) txahal-timus ehunetik aurkitu zen lehen aldiz, eta bere gene kodetzailea Escherichia coli-n klonatu da.Zehazki degradatu dezake DNA: RNA kateak RNA hibrido bikoiztuetan, ondorioz 3′-OH eta 5′-monofosfato muturrak dituzten oligonukleotidoak eta mononukleotidoak, ezin du kate bakarreko edo bikoitzeko DNA edo RNA degradatu.

RNasa

Funtzioa eta erabilera

Erribonukleasak azido erribonukleikoaren (ARN) degradazioa kataliza dezake eta artifizialki sintetiza daiteke.Pomada sendagarria topikoki erabiltzen da trauma eta artikulazioetako mina tratatzeko.Txostenen arabera, erribonukleasak ostalariaren zelulen metabolismoa alda dezake, birusaren sintesia eragotzi, gripearen birusaren ugalketa in vitro eragotzi eta oilasko enbrioietan vaccinia eta herpes birusaren sorrera eragotzi.Erribonukleasa eguneroko 180 mg-ko muskulu barneko injekzioaren erabilera klinikoa, entzefalitis epidemikoaren tratamendurako onuragarria, erribonukleasa azido erribonukleikoaren (RNA) degradazioa kataliza dezake eta orain artifizialki sintetiza daiteke.Pomada sendagarria topikoki erabiltzen da trauma eta artikulazioetako mina tratatzeko.Txostenen arabera, erribonukleasak ostalariaren zelulen metabolismoa alda dezake, birusaren sintesia eragotzi, gripearen birusaren ugalketa in vitro eragotzi eta oilasko enbrioietan vaccinia eta herpes birusaren sorrera eragotzi.Entzefalitis epidemikoaren tratamendurako onuragarria da egunero 180 mg-ko erribonukleasaren muskulu barneko injekzioaren erabilera klinikoa.

RNasa

Inhibitzaileen definizioa

RNasaren inhibitzaile-unitatearen definizioa: 5ng RNasaren A-ren jardueraren % 50 inhibitzeko beharrezkoa den entzima-kopurua unitate bat da.

RNasaren inhibitzaileek nola funtzionatzen duten

Guanidina isotiozianatoa:

Guanidina isotiozianatoa C2H6N4S formula molekularra duen konposatu organikoa da.Batez ere medikuntza biologikoan, erreaktibo kimikoan eta abarretan erabiltzen da. Guanidina isotiozianatoa proteina lisatzeko agente bat da, eta sarritan erabiltzen da diagnostiko molekularreko erreaktiboetan lisi-soluzioaren osagai nagusi gisa.Ehunak lisatu ditzake, zelulen egitura suntsitu eta azido nukleikoa nukleoproteinetatik disoziatu, eta RNasarekiko desnaturalizazio handia du.Gaur egun RNasaren inhibitzailerik eraginkorrena da.

TRIzol RNA osoa erauzteko erreaktibo berri bat da, zelula edo ehunetatik RNA osoa zuzenean atera dezakeena.Fenola eta guanidina isotiozianatoa bezalako substantziak ditu, zelulak azkar apurtu eta zelulek askatzen dituzten nukleasak inhibi ditzaketenak.

(Hala ere, guanidina isotiozianatoa arriskutsua da laborategiko ikertzaileen osasunerako).

RNAsina:

Arratoi gibeletik edo giza blastodermotik ateratako glikoproteina azidoa.Rnasin RNasaren inhibitzaile ez-lehiakorra da, eta hainbat RNasekin lotu daiteke horiek inaktibatzeko.

(Xehetasun gehiago: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Htenperatura altua:

Tenperatura altua proteina desnaturalizatzeko ohiko bide bat ere bada.

Dietilpirokarbonatoa (DEPC):

DEPC RNasaren inhibitzaile indartsua baina osatugabea da, RNasaren jarduera inhibitu dezakeena RNasaren talde aktiboaren aminoazido imidazol eraztunarekin konbinatuz proteinak desnaturalizatzeko.

Vanadyl erribonukleosidoen konplexua:

Banadio oxidoaren ioiek eta nukleosidoek osatutako konplexua, RNasari trantsizio-substantzia moduan lotzen zaiona, RNasaren jarduera ia erabat inhibitu dezakeena.

beste:

SDS, ureak, diatomea-lurrak eta abarrek ere nolabaiteko eragin inhibitzaile bat dute RNasan.

Adituen Iritziak

Li Yujie teknikari nagusia

Laborategi Saileko zuzendaria, Jiaozhou Ospitalea, Dongfang Ospitalea Tongji Unibertsitateari afiliatua

RNasa exogenoaren biodegradazioa saihesteko, maskarak, eskularruak eta txanoak maiz jantzi eta ordezkatu behar dira RNA erauzteko prozesuan.Beira guztia 2 ordu baino gehiagoz lehortzeko labean labean egon behar da 200 °C-tan.Gozogintzarako erabiltzen diren materialak, plastikoa adibidez, DEPC urarekin tratatu behar dira, eta, ondoren, ur destilatuarekin garbitu.ARNa ateratzeko, kontserbatzeko eta identifikatzeko erabiltzen diren erreaktiboak edo gailuak RNAri eskaini behar zaizkio, eta RNAren operazio-eremu independente bat ezarri behar da.

erreferentziak:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Australiako ume indigenetan beheko arnas infekzio akutua hasi baino lehengo nasofaringeko bakterioak eta birusak[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Txinako Prebentzio Medikuntza Elkartearen Ospitaleko Infekzioen Kontroleko Adarra.Mikrobioen ale klinikoak jaso eta ikuskatzeko jarraibideak [J].Chinese Journal of Hospital Infection, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Proba klinikoa Ten Thousand Why Biologia Molekularraren Test Bolumena"