Ondorengo arazo posibleen azterketaBukallapitxoa/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Arazketa-zutabea beteta dago

Kit honetan, DNA genomikoaren erauzketa-eragiketan, arazketa-zutabea zuzenean xurgatzen da laginaren lisi entzimatikoaren nahasketa zentrifugazio-urratsik gabe, eta arazketa-zutabea blokeatu egin daiteke entzimizazio osatugabea eta laginaren biskositate handia dela eta.

Kausa posible hauek hauek dira:

1. Ehun-laginen digestio entzimatiko osatugabea.

Gomendioa: Foregene Proteasaren laginak prozesatzeko denbora behar bezala luzatu daiteke edo gainnadantea zentrifugazioaren ondoren hartu daiteke 12.000 rpm-an (~ 13.400× g) 5 minutuz.

2. Ehun-laginak edo ehun handiak gehiegi erabiltzea.

Gomendioa: hobe da 1 ez gainditzeaBukal laginaren labea;lagina handiegia bada, handitu Buffer ST1, Foregene Protease, Buffer ST2 dosia.

3. Laginaren biskositatea altuegia da.

Gomendioa: laginak behar bezala diluitu daitezke Tris-HCl 10 mMrekin DNA genomikoa atera aurretik.

4. Odol txartelaren zatiak zurrupatu dira.

Gomendioa: odol-orbanaren (FTA Txartela) erauzketa genomikoaren 6. urratseko zentrifugazio denbora iragankorra behar bezala luzatu daiteke.

Etekin baxua edo DNArik ez

Askotan, DNA genomikoaren errendimenduan eragina duten hainbat faktore daude, besteak beste, laginaren jatorria, laginak biltegiratzeko baldintzak, laginak prestatzea, manipulazioa, etab.

ADN genomikoa ezin da erauzketan lortu

Kausa posibleak hauek dira:

1. Laginak desegoki kontserbatzeak edo denbora gehiegi gordetzeak DNA genomikoaren degradazioa dakar.

Gomendioa: Ahozko laginak lagin berriak hartu behar dira, eta ez da gomendagarria DNA genomikoaren erauzketa eragiketetarako kontserbatutako laginak erabiltzea;odol lekuen laginek kalitatea kualifikatua dela ziurtatu behar dute eta biltegiratze-denbora ez dela luzeegia izan behar.

2. Ehun gutxiegi erabiltzeak dagokion DNA genomikorik ez ateratzea eragin dezake.

Gomendioa: Jarraitubuccal Eragiketa gidan laginak hartzeko argibideak, eta garbitu ahalik eta aldi gehienetan, DNA genomikoa ateratzeko ahozko laginari zelula nahikoa erantsi ahal izateko;odol-orbanen laginak ateratzeko, odol-puntuen ebaketa-eremua egoki handitu daiteke.

3. Foregene Proteasa desegoki kontserbatzen da, eta horren ondorioz bere jarduera gutxitu edo inaktibatzen da.

Gomendioa: berretsi biltegiratzeko baldintzakForegene Protease edo ordezkatu Foregene Protease berri batekin erreakzio entzimatikorako.

4. Kitaren kontserbazio desegokia edo biltegiratze denbora luzeegia da, eta ondorioz kitaren osagai batzuen hutsegitea da.

Gomendioa: berria erosteaBukal DNA lasterisolatze lotutako izapideetarako kit.

5. Buffer WB-k ez du etanol absoluturik gehitzen.

Gomendioa: baieztatu WB tamponak etanol absolutuaren bolumen zuzena gehitzen duela.

6. Eluiatzailea ez da behar bezala gehitzen silikonazko filmari.

Gomendioa: Gehitu 65°Caurrez berotutako elutzailea silikonazko mintzaren erdialdera jaisten da eta giro-tenperaturan utzi 5 minutuz eluzioaren eraginkortasuna areagotzeko.

Lerrendimendu handiko DNA genomikoa isolatuta

Kausa posible hauek hauek dira:

1. Laginak desegoki kontserbatzeak edo denbora gehiegi gordetzeak DNA genomikoaren degradazioa dakar.

Gomendioa: Ahozko laginak hobe lagin berriak dira, eta kontserbatutako laginak ez dira erabili behar DNA genomikoa erauzteko.

2. Ehun-lagin kopurua txikiegia bada, ateratako DNA genomikoaren edukia txikiagoa izango da.

Gomendioa: Jarraitu funtzionamendu-gidako ahozko laginak lagintzeko jarraibideei, ahalik eta gehien garbitu, DNA genomikoa ateratzeko ahozko laginak zelula nahikoa erantsi ahal izateko.

3. Foregene Proteasa desegoki kontserbatzen da, eta horren ondorioz bere jarduera gutxitu edo inaktibatzen da.

Gomendioa: berretsi biltegiratzeko baldintzakthe Foregene Protease edo ordeztu berri batekin Foregene Proteasa erreakzio entzimatikorako.

4. Eluente-arazoak.

Gomendioa: Erabili Buffer EB eluzioa egiteko;ddH erabiliz gero₂O edo beste eluante batzuk, baieztatu eluatuaren pHa 7,0-8,5 artean dagoela.

5. Eluatua ez da behar bezala gehitzen tantaka.

Gomendioa: Gehitu eluante-tantak silikonazko mintzaren erdian eta utzi giro-tenperaturan 5 minutuz eluzioaren eraginkortasuna areagotzeko.

6. Eluzio-likidoa gutxiegi pilatzen da.

Gomendioa: Erabili elutzailea DNA genomikoaren eluzioa egiteko argibideetan eskatzen den moduan, gutxienezez gutxiago 15 bainoμl.

Loi garbitasuna of DNA genomikoaisolatuta

DNA genomikoaren garbitasun baxuak beheranzko esperimentuen porrota edo emaitza desegokiak ekar ditzake, hala nola: entzimak ezin dira ireki, PCR-k ezin du interesgarri den gene zatia lortu, etab.

Kausa posibleak hauek dira:

1. Heteroproteinen kutsadura, ARNaren kutsadura.

Analisia: arazketa-zutabea ez zen Buffer PW erabiliz garbitu;Buffer PW garbiketa arazteko zutabea ez zen zentrifugo abiadura egokia erabiliz garbitu.

Gomendioa: gainnadantean prezipitaziorik ez dagoela ziurtatu etanola gehitu aurretik;ziurtatu garbiketa-zutabea argibideen arabera garbitzen duzula, eta urrats hau ezin da alde batera utzi.

2. Ioien kutsadura kutsadura.

Analisia: Buffer WB garbiketa-arazketa-zutabea behin bakarrik utzi edo garbitu zen, eta ondorioz, hondar kutsadura ionikoa sortu zen.

Gomendioa: Ziurtatu Buffer WB 2 aldiz garbitu behar den bezala, hondar ioiak ahalik eta gehien kentzeko.

3. RNA entzimaren kutsadura.

Analisia: Atzerriko RNasak bufferra gehitu ziren;Buffer PW garbiketa-eragiketa okerra izan zen, eta RNasaren hondakinak sortu ziren, eta beheranzko RNAren eragiketa esperimentaletan eragina izan zuten, in vitro transkripzioa adibidez.

Gomendioa: Foregene serieko azido nukleikoaisolatukit-ek RNA kendu dezakete RNasa gehitu gabe,horrela buccal Swab/FTA Txartela DNA isolatzeko kitbeharrik't gehitu RNase;ziurtatu Buffer PW garbiketa-arazketa-zutabearen argibideak jarraitzen dituzula, eta urrats hau ezin da baztertu.

4. Etanol hondarra.

Analisia: Buffer WB-k ez zuen hodi hutsaren zentrifugazioa egin arazte-zutabea garbitu ondoren.

Gomendioa: Egin hodi hutsen zentrifugazio eragiketa zuzena argibideen arabera.

5. Beste ezpurutasunen kutsadura.

Analisia: gordetako laginak edo lagin bereziak ez dira aurrez tratatzen.

Gomendioa: ondo tratatu lagina agindu bezala.