PCRren jaiotza
PCR (polimerasaren kate erreakzioa)
30 urte baino gehiago igaro dira polimerasaren kate-erreakzioa asmatu zenetik.30 urte baino gehiagoz, mundu osoko jakintsu ugarik osatzen eta hobetzen jarraitu ostean, PCR teknologia Bizitza Zientzien eremu osoan oinarrizko ikerketa-metodorik erabiliena eta erabiliena eta garrantzitsuena bihurtu da.
TouchDown PCR, Real-Time PCR, Multi PCR, etab. PCR teknologia tradizionalen aplikazio zabalean oinarrituta garatutakoak, baita sortu berri den Digital PCR (PCR digitala), ikertzaile zientifiko gehienen ikerketa-metodoak asko aberastu dituzte eta Bizitza Zientzi modernoen garapen-prozesua asko azkartu dute, batez ere biologia molekularra, gizadiaren ikerketaren bizitza eta izaera osoari ekarpen handiak egin dizkiote.
PCR teknologia tradizionalen akatsak
Azido nukleiko konplexuen bereizketa etaerauzketa:
★ PCR teknologia tradizionala: beharrezkoa
★ PCR eratorritako teknologia: beharrezkoa
★ DNA eta RNA laginak: alde handiak, funtzionamendu-eskakizun zailak
★ Gorputzeko arriskuak: erreaktibo toxikoek gorputzari kalte egiten diote
PCR teknologia tradizionalak eta teknologia deribatuak aurrebaldintza bat dute azido nukleikoen bereizketa eta arazketa
Edozein lagin biologikok lagin-prozesamendu korapilatsu eta neketsu batzuk igaro behar ditu PCR teknologiaren eskakizunak betetzen dituzten azido nukleikoen laginak lortzeko.
DNA eta RNA bereiztea eta erauztea beti izan da ikertzaile zientifiko garrantzitsuek egunero errepikatu behar duten oinarrizko zeregina.
Laginen arteko alde handiak direla eta, DNA eta RNAren bereizketa eta erauzketa prozesuak ere oso desberdinak dira.Lan honek gaitasun tekniko handia eskatzen die operadoreei.Banatze- eta erauzketa-teknik tradizionalek epe luzerako kontaktua eskatzen dute oso toxiko diren erreaktibo kimiko batzuekin.Eragilearen gorputzean kalte itzulezinak eragingo ditu, eta esperimentuan zehar kalte zuzenak ere eragingo ditu.
Aldi berean, aztertzeko lagin kopuru handia dutenentzat, azido nukleikoak bereiztea eta erauztea lan handia da.
Merkatuan dauden azido nukleikoak isolatzeko eta erauzteko kitak helduak dira eta marka asko daude, baina gutxi gorabehera berdinak dira.Silice gel mintz zutabe zentrifugoen kit bat edo ale magnetikoen metodoaren kit bat den ala ez, denbora asko behar du eta garestia da.Kitaren kostuaz gain, laborategiko ekipoetarako baldintza bereziak ere badaude.Ale magnetikoen metodoan erabiltzen den lan-estazio automatizatua eskala handiko balio handiko ekipamendu oso tipikoa da, eta hori laborategiarentzat gastu handia da.
Laburbilduz
PCR esperimentuak egin aurretik, laginen aurretratamendua saihestezina eta beti buruhaustea da ikertzaileentzat.Arazo hau nola konpondu eta PCR esperimentuak azido nukleikoen bereizketa eta erauzketarik gabe egin daitezkeen ala ez ikertzaile zientifiko eta laborategi klinikoko langile gehienen pentsamendua izan da beti.
Foregene-ren konponbidea
Direct PCR teknologiari eta erlazionatutako kitei buruzko urte luzeetan ikerketa zorrotza egin ondoren, Forgene-k arrakastaz hautsi zituen botilako lepo asko eta arrakastaz lortu zuen PCR zuzena erresistentzia eta moldagarritasun handiko lagin mota askotarako, ikertzaileek azido nukleikoen bereizketa eta erauzketa astun eta arriskutsuak kentzeko aukera emanez.Horrek guztion lan-intentsitatea asko murriztuko du, esperimentu-prozesua bizkortuko du eta ikerketa zientifikoen eta probaren kostuak aurreztuko ditu.
Forgenek DirectPCRren ulermena eta ezagutza
Lehenik eta behin, DirectPCR teknologia zuzeneko PCR teknologia da hainbat lagin biologikoko ehunetarako.Baldintza tekniko honetan, ez dago azido nukleikoak bereizi eta atera beharrik, eta ehun-lagina zuzenean erabiltzen da objektu gisa, eta xede-gene-hastapenak gehitzen dira PCR erreakziorako.
Bigarrenik, DirectPCR teknologia ez da DNA txantiloiaren anplifikazio teknologia tradizionala soilik, RNA txantiloiaren alderantzizko transkripziorako PCR ere barne hartzen du.
Hirugarrenik, DirectPCR teknologiak ehun-laginetan PCR erreakzio kualitatibo arruntak egiten ditu zuzenean, baizik eta denbora errealeko qPCR erreakzioak ere barne hartzen ditu, erreakzio-sistemak atzeko fluoreszentzia interferentziari aurre egiteko eta fluoreszentzia kencher endogenoak antagonizatzeko gaitasun handia izatea eskatzen baitu.
Laugarrenik, DirectPCR teknologiaren xede diren ehun-laginek azido nukleikoen txantiloiak askatzea besterik ez dute behar eta ez dituzte PCR erreakzioa oztopatzen duten proteinak, polisakaridoak, gatz ioiak, etab.Honek erreakzio sistemako azido nukleiko polimerasa eta PCR Mixak itzulgarritasun eta moldagarritasun bikaina izatea eskatzen du, eta baldintza konplexuetan entzimaren jarduera eta erreplikazioaren zehaztasuna bermatu ditzake.
Bosgarrenik, DirectPCR teknologiaren xede diren ehun-laginek ez dute azido nukleikoen aberaste-tratamendurik jasan, eta txantiloi-kantitatea oso txikia da, eta horrek erreakzio-sistemaren sentsibilitate eta anplifikazio-eraginkortasun oso handia eskatzen du.
Ondorioa
DirectPCR teknologia PCR teknologia sortu zenetik azken 30 urteotan izandako garapen teknologiko eta berrikuntza garrantzitsuenetako bat da.Forgene teknologia honen aitzindari eta berritzailea izan da eta izango da.
DirectPCR teknologiaren aplikazio aukera oso zabala da.Teknologia honen etengabeko hobekuntzak eta sustapenak aldaketa subertsiboak ekarriko ditu ziur aski ikerketa zientifiko eta ikuskapen lanetan.PCR teknologiaren iraultza da.
Argitalpena: 2017-02-21
