PCR esperimentua SOP ezartzea esperimentuetako langileen portaera normalizatzeko.
Esperimentatzaileak zorrozki betetzen ditu funtzionamendu-prozedurak, eta giza faktoreek eragin dezaketen PCR kutsadura gutxitzen du edo kutsadura gertatzea saihesten du.Horrez gain, esperimentatzaileak dagozkion ezagutza eta trebetasun profesionalak izan behar ditu, besteak beste, erlazionatutako ekipoak ustiatzeko trebetasuna, lan-prozesu osoa argitzea, kutsaduraren tratamendu-metodoak eta laborategiko kalitate-kontrol-metodoak menperatzea eta proben emaitzak zuzen interpretatzeko gai izatea.
PCR laborategi estandar bat ezarri.
PCR laborategia lau eremutan banatzen da printzipioz, hots, erreaktiboak prestatzeko eremua, laginak prozesatzeko eremua, anplifikazio eremua eta anplifikazio produktuaren analisiaren eremua.Lehenengo bi eremuak anplifikazio aurreko eremuak dira, eta azken bi eremuak anplifikazio osteko eremuak.Aurreanplifikazio eremua eta anplifikazio osteko eremua zorrotz bereizi behar dira.Material esperimentalak, erreaktiboak, erregistro-paperak, boligrafoak, garbiketa-materialak, etab., anplifikazio aurreko eremutik anplifikazio osteko eremura soilik isur daitezke, hau da, erreaktiboak prestatzeko eremutik → laginak prozesatzeko eremutik → anplifikazio eremua → anplifikazio produktuaren analisiaren eremura, eta ez dute atzera egin behar.Laborategiko aire-fluxuak anplifikazio aurreko eremutik anplifikazio osteko eremura ere joan behar du, eta ez atzerantz.Behean azaltzen da PCR laborategiaren diseinu aproposa:
A irudia: PCR laborategiko konfigurazio modu aproposa presio negatiboarekin buffer gelan
B irudia: Buffer gelan presio positiboa duen PCR laborategiko konfigurazio modu ideala
A irudian eta B irudian emandako PCR laborategiko konfigurazio-diagramek konfigurazio-modu ezin hobea izan beharko lukete, eta baldintzak dituen laborategiak modu horretara jo dezake diseinurako.Laborategi arruntetarako, gomendagarria da PCR anplifikazio-eremua eta produktuaren analisi-eremua bereiztea, eta estalkiaren irekiera ahalik eta gehien murriztu behar da laginak prestatzeko eremuan eta PCR anplifikazio-eremuan.Gogoratu: produktuak eta hornigai esperimentalak produktuak aztertzeko eremuan erabat debekatuta daude laginak prestatzeko gunera eta PCR anplifikatzeko eremura eramatea.
Laborategiak PCR detekzioa eta identifikazioa soilik egiten badu, PCR kuantitatibo fluoreszentea erabiltzea gomendatzen da ohiko PCRaren ordez.
Fluoreszentzia-PCR detektatzeko emaitzak fluoreszentzia-seinaleen bidez bildu eta aztertu daitezke, beraz, ez dago erreakzioaren ondoren elektroforesirako estalkia ireki beharrik, eta horrek erreakzio-produktuen isurketak aerosolak sortzeko eragindako PCR produktuaren kutsadura saihesten du.Gel-elektroforesiaren karga-fasean tapoien irekidura kopurua handitzen baduzu, litekeena da aerosol kutsadura gertatzea.PCR kuantitatiboaren aplikazioa sustatzea eta pixkanaka PCR kualitatiboa ordezkatzea gomendatzen da.
PCRren aurkako UNG produktuak kutsatzeko sistema erabiltzen da PCR erreakziorako.
Sistemak dUTP erabiltzen du dTTPren ordez.PCR erreakzioaren ondoren, PCR produktu guztiak (DNA zatiak) dUTPrekin sartzen dira;PCR erreakzioaren hurrengo txandan, sistemari gehitutako UNG entzima 37 °C-tan inkubatzen da 5 minutuz PCR baino lehen, eta horrek dUTP duten DNA zati guztiak bereziki degrada ditzake, eta ondoren PCR erreakzioa egin.Honek PCR produktuek eragindako aerosolen kutsadura guztiz kendu dezake.Efektua beheko irudian ageri da:
Oharra: zuzeneko PCR serierako, Foregene-ren PCRren aurkako produktuen kutsadura sistemaren serieko produktuak aukeratu ditzakezu.Iradoki
Eskala handiko genotipaketa probak egiten dituzten laborategietarako, oso gomendagarria da UNG anti-PCR produktuaren kutsadura sistema erabiltzea erreaktiboak probatzeko, zentzuzko laborategiak eraikitzeaz gain.
Oroigarria: sistema hau erabiltzeak ezin du kendu PCR produktuaren kutsadura dagoeneko eragindakoa.Hori dela eta, UNG sistema dagokion probaren hasieran erabili behar da, eta UNG sistema PCR anplifikaziorako, PCR produktuen kutsadura saihesteko.
Eskala handiko probak egiterakoan Foregeneren Direct PCR-UNG sistema erabiltzea gomendatzen da, hala nola:
Landare hosto zuzeneko PCR Kit-UNG;
Landare Seed Direct PCR Kit-UNG;
Animalien ehunen Direct PCR Kit-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Foregene-ren kit sorta hauPCR detekzioa azkar eta eskala handian egiteaz gain, PCR produktuen kutsadura eraginkortasunez prebenitu eta kontrolatu ere egin dezake.
Argitalpenaren ordua: 2021-03-19
