Entzumen-galera (HL) gizakietan zentzumen-urritasunen gaixotasun ohikoena da.Herrialde garatuetan, haurren prelingual-gorreriaren % 80 inguru faktore genetikoek eragiten dute.Ohikoenak gene bakarreko akatsak dira (1. irudian ageri den bezala), 124 gene-mutazio gizakien entzumen-galera ez-sindromikoarekin lotuta aurkitu dira, gainerakoak ingurumen-faktoreek eragindakoak dira.Inplante koklearra (entzumen-nerbioari zuzenean estimulazio elektrikoa ematen dion barruko belarrian jartzen den gailu elektronikoa) HL larria tratatzeko aukerarik eraginkorrena da, eta, aldiz, entzumen-aparatua (soinu-uhinak bihurtzen eta anplifikatzen dituen kanpoko gailu elektronikoa) HL moderatua duten pazienteei lagun diezaieke.Hala ere, gaur egun ez dago HL hereditarioa (GHL) tratatzeko sendagairik eskuragarri.Azken urteotan, terapia genetikoak gero eta arreta handiagoa jaso du barne belarriko disfuntzioa tratatzeko ikuspegi itxaropentsu gisa.

1. irudia.Gorreri lotutako aldakuntza motaren banaketa.[1]

Duela gutxi, Salk Institutuko eta Sheffield-eko Unibertsitateko zientzialariek Molecular Therapy – Methods & Clinical Development [2] ikerketaren emaitza argitaratu zuten, zeinak herentziazko gortasunaren in vivo gene-terapiaren aplikazio-aukera zabalak erakutsi zituen.Uri Manor-ek, Salk Institutuko ikertzaile laguntzaile eta Waitt Center for Advanced Biophotonics-eko zuzendariak, entzumen-galera larriarekin jaio zela esan zuen eta entzumena berreskuratzea opari zoragarria izango zela uste zuen.Aurretik egindako ikerketek Eps8 aktina lotzeko eta estaltzeko jarduerak dituen aktina erregulatzeko proteina bat da;Ile-zeluletan, Eps8-k MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 eta GNAI3-ekin osatutako proteina-konplexua gehienetan dago gehienetan Estereozilio luzeen puntak, zeinak MYO15A-rekin batera BAIAP2L2 estereozilio laburragoen muturretan lokalizatuta, ile-sorta mantentzeko beharrezkoak dira.Hori dela eta, Eps8-k ile-zelulen estereozilioen luzera erregula dezake, entzumen-funtzio normalerako ezinbestekoa dena;Eps8 ezabatzeak edo mutazioak estereozilio laburrak ekarriko ditu, eta horrek ezin izango du soinua behar bezala bihurtu garunaren pertzepziorako seinale elektrikoetan, eta horrek gorreria dakar..Aldi berean, Walter Marcotti kolaboratzaileak, Sheffield-eko Unibertsitateko irakasleak, aurkitu zuen ile-zelulak ezin direla normal garatu Eps8-ren gabezian.Ikerketa honetan, Manor eta Marcotti elkartu ziren zelula estereoziliarrei Eps8 gehitzeak haien funtzioa berreskuratu zezakeen eta, aldi berean, saguen entzumena hobetuko ote zen ikertzeko.Ikerketa-taldeak Anc80L65 adeno-asoziatutako birusaren (AAV) bektorea erabili zuen EPS8 basatia duen sekuentzia kodetzailea Eps8-/- P1-P2 sagu jaioberrien koklean leiho biribilaren mintz injekzio bidez emateko;saguaren ile-zeluletako kokleoetan Estereozilioen funtzioa heldu baino lehen konpondu zen;eta konponketa-efektua irudien teknologia eta estereozilioen neurketa izan zen.Emaitzek erakutsi zuten Eps8-k estereozilioen luzera handitu zuela eta maiztasun baxuko zeluletan ile-zelulen funtzioa berreskuratu zuela.Era berean, denboraren poderioz, zelulek gene terapia honen bidez erreskatatzeko gaitasuna galtzen zutela ikusi zuten.Ondorioz, baliteke tratamendu hau umetokian eman behar izatea, Eps8-/- ile-zelulak saguak jaio ondoren konpontzerik gabeko kalteak heldu edo pilatu izana izan daitezkeelako."Eps8 funtzio ezberdin asko dituen proteina da, eta oraindik asko dago arakatzeko", esan zuen Manorrek.Etorkizuneko ikerketek Eps8 gene-terapiak garapen-fase desberdinetan entzumena berreskuratzeko duen eragina ikertuko du, eta tratamendu aukerak luzatzea posible den ala ez.Kasualitatez, 2020ko azaroan, Israelgo Tel Aviv Unibertsitateko KarenB Avraham irakasleak bere emaitzak argitaratu zituen EMBO Molecular Medicine [3] aldizkarian, terapia genetikoen teknologia berritzailea erabiliz, AAV9-PHP adeno-asoziatutako birus sintetiko kaltegabe bat sortzeko.B, Syne4-/- saguen ile-zelulen gene-akatsa Syne4-ren kode-sekuentzia zeraman birus bat injektatu zen saguen barne-belarrian, ile-zeluletan sartu eta eramandako material genetikoa askatu ahal izateko, heldu eta normal funtzionatzeko aukera emanez (2. irudian bezala).

2. irudia.Barne-belarriaren anatomiaren irudikapen eskematikoa, Corti-ren organoari eta nesprin-4-ren funtzio zelularrari arreta jarriz.

Ikus daiteke gene-terapia erabiltzeak gene mailan herentziazko gaixotasunak tratatzeko helburua lortzeko tratamendurako gene mutatuak txertatuz, kenduz edo zuzenduz (hau da, gaixotasunaren aldaketa genetikoak kontrolatuz) eragin kliniko handia duela.aplikazio-aukerak.Gorreria genetikoki gabeziarako egungo terapia genetiko metodoak kategoria hauetan bana daitezke:

geneen ordezkapena

Geneen ordezkapena da, dudarik gabe, terapia genikoaren formarik "zuzenena", gene akastun bat identifikatu eta genearen kopia normal edo basati batekin ordezkatzean oinarritzen dena.Glutamato garraiatzaile besikularraren 3 (VGLUT3) genea ezabatzeak eragindako entzumen galeraren barne-belarriaren gene-terapiako lehen azterketa arrakastatsua;AAV1-ek VGLUT3 gainespresio exogenoaren bidalketa barne-belarriko ile-zeluletan (IHCs) Entzumenaren berreskurapen iraunkorra, zinta sinaptikoa morfologia partziala berreskuratzea eta erantzun konbultsiboak eragin ditzake [4].Dena den, goiko sarreran deskribatutako AAV-k emandako bi gene-ordezkapenak barne hartutako adibideetan, garrantzitsua da entzumen-galera hereditarioko nahaste mota batzuetarako erabiltzen diren gene-ezabaketa mota batzuetarako erabiltzen diren sagu-ereduak gizakiekiko aldi baterako desberdinak direla, eta P1 saguetan barne-belarria garapen-fasean dagoela.Aitzitik, gizakiak barne belarri heldu batekin jaiotzen dira.Desberdintasun horrek saguaren emaitzak giza gorreriaren nahaste hereditarioen tratamendurako balizko aplikazioa saihesten du, terapia genetikoa saguaren belarri helduetan ematen ez bada.

Geneen edizioa: CRISPR/Cas9

"Geen ordezkapenarekin" alderatuta, geneak editatzeko teknologiaren garapenak gaixotasun genetikoak errotik tratatzeko hasiera ekarri du.Garrantzitsua da, geneak editatzeko metodoak gainespresio-metodo tradizionalaren gabeziak konpontzen ditu, herentziazko gortasunaren gaixotasun nagusietarako egokiak ez diren eta gainespresio-metodoak luzaroan irauten duen arazoa.Txinako ikerlariek Myo6C442Y alelo mutantea berariaz kanporatu ostean AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2 genea editatzeko sistema erabiliz Myo6WT/C442Y saguetan, eta kanporaketa egin eta 5 hilabeteren buruan, saguak Modeloaren entzumen-funtzioa berreskuratu zen;aldi berean, barne belarriko ile-zelulen biziraupen-tasa hobetu zela, zilioen forma erregular bihurtu zela eta adierazle elektrofisiologikoak zuzendu ziren [5] ere ikusi zen.Myo6 genearen mutazioak eragindako herentziazko gorreriaren tratamendurako CRISPR/Cas9 teknologia erabiltzen duen munduko lehen ikerketa da hau, eta geneak editatzeko teknologiaren ikerketa aurrerapen garrantzitsua da herentziazko gortasunaren tratamendurako.Tratamenduaren itzulpen klinikoak oinarri zientifiko sendoa eskaintzen du.

Gene-terapia emateko metodoak

Gene-terapia arrakastatsua izan dadin, DNA-molekulak biluziak ezin ditu zeluletan eraginkortasunez barneratu beren hidrofilia eta fosfato-taldeen karga negatiboa dela eta, eta osatutako azido nukleikoen molekulen osotasuna bermatzeko, metodo seguru eta eraginkor bat aukeratu behar da.Osatutako DNA xede-zelula edo ehunera iristen da.AAV oso erabilia da gaixotasunen tratamendurako bidalketa-bide gisa, bere eragin infekzioso handiagatik, immunogenikotasun baxuagatik eta hainbat ehun motatako tropismo zabalagatik.Gaur egun, ikerketa-lan handi batek AAV-ren azpimota ezberdinen tropismoa zehaztu du saguaren koklean dauden zelula-mota desberdinekiko.Zelula espezifikoen sustatzaileekin konbinatuta AAV entrega-ezaugarriak erabiliz, zelulen adierazpen espezifikoa lor daiteke, eta horrek helburuz kanpoko efektuak murriztu ditzake.Horrez gain, AAV bektore tradizionalen alternatiba gisa, AAV bektore sintetiko berriak etengabe garatzen ari dira eta barne-belarrian transdukzio-gaitasun handiagoa erakusten dute, eta horietatik AAV2/Anc80L65 da gehien erabiltzen dena.Biralak ez diren entrega metodoak metodo fisikoetan (mikroinjekzioa eta elektroporazioa) eta metodo kimikoetan (lipidoetan oinarritutakoak, polimeroetan oinarritutakoak eta urrezko nanopartikulak) bereiz daitezke.Bi ikuspegiak herentziazko gorreriaren nahasteen tratamenduan erabili dira eta abantaila eta muga desberdinak erakutsi dituzte.Terapia genetikoa ibilgailu gisa entregatzeko ibilgailuaz gain, in vivo geneak administratzeko planteamendu desberdinak erabil daitezke xede-zelula mota, administrazio-bide eta eraginkortasun terapeutiko desberdinetan oinarrituta.Barne belarriaren egitura korapilatsuak helburu-zeluletara iristea zailtzen du eta genoma editatzeko agenteen banaketa motela da.Mintz-labirintoa hezur tenporalaren hezur-labirintoaren barruan dago eta hodi koklearra, hodi erdizirkularra, utrikulua eta puxika biltzen ditu.Bere isolamendu erlatiboak, zirkulazio linfatiko minimoak eta odoletik bereizteak odol-labirintoko hesi baten bidez terapeutikoen entrega sistemiko eraginkorra mugatzen dute jaioberrien saguentzat soilik.Gene-terapiarako egokiak diren titulu birikoak lortzeko, beharrezkoa da bektore birikoen tokiko injekzio zuzena barne belarrian.Ezarritako injekzio-bideak honako hauek dira [6]: (1) leiho mintz biribila (RWM), (2) trakeostomia, (3) kokleostomia endolinfatikoa edo perilinfatikoa, (4) leiho mintz biribila gehi Hodi fenestrazioa (CF) (3. irudian bezala).

3. irudia.Terapia genikoaren barne belarrian ematea.

Terapia genetikoan aurrerapen asko egin badira ere, translazio-helburu klinikoetan oinarrituta, lan gehiago egin behar da terapia genetikoa gaixotasun genetikoak dituzten pazienteentzako lehen lerroko tratamendu aukera bihurtu aurretik, batez ere bektore eta entrega metodo seguru eta eraginkorren garapenean.Baina uste dugu etorkizun hurbilean tratamendu mota hauek terapia pertsonalizatuaren oinarrizko bihurtuko direla eta eragin oso positiboa izango dutela nahaste genetikoak dituzten pertsonen eta haien familien bizitzan.

Foregene-k errendimendu handiko baheketa-kit bat ere jarri du abian zuzendutako geneetarako, azkarra dena eta alderantzizko transkripzioa eta qPCR erreakzioak egin ditzakeena RNA erauzketarik gabe.

Produktuen Estekak

Cell Direct RT-qPCR kit-Taqman/SYBR GREEN I

Produktuari buruzko informazio gehiago lortzeko, jarri harremanetan:

overseas@foregene.com