Duela gutxi, zerbait harrigarria aurkitu dut!Haren inguruko esperimentu-profesional aurreratu askok ez dituzte oinarrizko ezagutza esperimental-puntu batzuk ere ezagutzen.

Adibidez, erantzun al diezaiekezu honako galdera hauei?

Alderik al dago OD260 eta A260 artean?Zer esan nahi du bakoitzak?
OD dentsitate optikoaren laburdura da (dentsitate optikoa), A absorbantziaren laburdura da (absorbantzia), bi kontzeptuak benetan berdinak dira, "dentsitate optikoa" "xurgantzia" da, baina "dentsitate optikoa" estandar nazional gehienekin bat dator eta estandarizatuagoa da.

Normalean OD balioa 260 nm-tan neurtzen dugu azido nukleikoaren kontzentrazioa kalkulatzeko, beraz, zer adierazten du 1OD?
Azido nukleikoak 260 nm-ko uhin-luzeran duen xurgapen maximoa du, DNA eta RNA dituena, baita azido nukleiko zati zatituak ere (hau da gakoa).
260 nm-ko uhin-luzeran neurtutako OD balioa OD260 gisa erregistratu zen.Lagina purua bada, OD260 balioak azido nukleikoaren laginaren kontzentrazioa kalkula dezake.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (kate bikoitzeko DNA)
=37 μg/ml ssDNA (kate bakarreko DNA)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPak (oligonukleotidoak)
Ba al dago konexiorik eta desberdintasunik RT-PCR, Realtime-PCR eta QPCRren artean?
RT-PCR alderantzizko transkripzioa PCR laburra da
Denbora errealeko PCR=qPCR, denbora errealeko PCR kuantitatiboaren laburpena
Denbora errealeko PCR (denbora errealeko PCR kuantitatiboa fluoreszentea) eta Alderantzizko Transkripzioa PCR (alderantzizko transkripzio PCR) biak RT-PCR gisa laburtuta daudela dirudi.Baina nazioarteko konbentzioa hauxe da: RT-PCR berariaz alderantzizko transkripzioaren PCRri egiten dio erreferentzia.

Zeintzuk dira biologian DNA/RNAren luzera deskribatzeko gehien erabiltzen diren nt, bp eta kb?
nt = nukleotidoa
bp = oinarri bikotea oinarri bikotea
kb = kilobase

Jakina, esango zenuke jende askori ez zaiela axola xehetasun txiki hauek!Denek egiten dute hori, eta inork ez dizu galdetuko zer den.Badakizu hau ez dela beharrezkoa, ezta?

Ez, Ez, Ez, oso beharrezkoa da hau jakitea!horregatik?
Artikulu bat argitaratu nahi duzulako!Anaia!Graduatzera edo ikerketa zientifikoko lorpenak lortu nahi badituzu, artikuluetan oinarritu behar zara hitz egiteko!

Azido nukleikoen erauzketa esperimenturik errazena eta oinarrizkoena izan behar da.Azido nukleikoaren erauzketa kalitateak zuzenean zehazten ditu ondorengo esperimentuen emaitzak.

Askotan esan dudan arren, oraindik axola ez zaien lagun asko daude.Oraingoan artikulutik kentzea erabaki dut!

Denbora errealeko PCR esperimentu kuantitatiboak argitaratzeko gutxieneko informazioa, MIQE deritzona, nazioartean abian jarritako fluoreszentzia-esperimentu kuantitatiboen jarraibideen multzoa da, fluoreszentziako PCR kuantitatiboko esperimentuak ebaluatzeko eta artikuluak argitaratzeko beharrezkoa den informazio esperimentalerako gutxieneko estandarrak proposatzen dituena.Esperimentatzaileak emandako baldintza esperimentalen eta analisi-metodoen bidez, aztertzaileek hobeto ebalua dezakete ikertzailearen eskema esperimentalaren baliozkotasuna.

Ikusten denez, azido nukleikoen erauzketa atalean, honako detekzio elementu hauek proposatu dira,

"E"-k eman beharreko informazioa adierazten du eta "D"-k, behar izanez gero, eman beharreko informazioa.

Forma oso konplikatua da, izan ere, denek hasi behar dutela esan nahi dut

purutasuna (D), etekina (D), osotasuna (E) eta koherentzia (E) lau alderdi hauetan azido nukleikoak ebaluatzeko.

Ohitura esperimentalen arabera, lehenik eta behin garbitasun eta kontzentrazio ebaluazio metodoei buruz hitz egin.

OD neurketa da esperimentatzaileentzat detektatzeko metodorik gogokoena eta errazena.Printzipioari dagokionez, ez naiz hemen xehetasunetan sartuko.Laborategi askok gaur egun ultramikroespektrofotometroak erabiltzen dituzte azido nukleikoen laginak zuzenean kuantitatiboki aztertzeko.Absorbantzia-balioa bistaratzen duen bitartean, programak zuzenean ematen ditu kontzentrazio-balioa (azido nukleikoa, proteina eta koloratzaile fluoreszentea) eta erlazionatutako erlazioak.OD balioaren analisiari dagokionez, Gorde argazki hau eta ondo egongo zara.

OD balio unibertsala irtenbideen zerrenda

Hala ere, ohar batzuk bereizita atera behar dituzu.

(Azken finean, badakit aurreztu eta behar dituzun arte itxaron behar duzula izan behar duzula!)

Oharra 1 Ekipamendua

OD balioa ekipamendu ezberdinek eragingo dute.OD260 tarte jakin batean dagoen bitartean, OD230 eta OD280 balioak esanguratsuak dira.Adibidez, Eppendorf D30 arruntaren absorbantzia-tartea 260nm-tan 0 ~ 3A da, eta Thermo-ren NanoDrop One 260nm-koa da.0,5 ~ 62,5A-ren absorbantzia-tartea.

2. oharraDiluzio-erreaktiboa

OD balioa erreaktibo ezberdinen diluzioak eragin dezake.Adibidez, ARN araztuaren OD260/280 irakurketa pH-an7,5 10 mM TrisBuffer 1,9-2,1 artean dago, bitarteanur-disoluzio neutroaratioa txikiagoa izango da, agian 1,8-2,0 bakarrik, baina horrek ez du esan nahi RNAren kalitatea desberdintasuna aldatzen denik.

3. oharraSubstantzia hondarrak

Hondar-substantziak egoteak azido nukleikoaren kontzentrazioa neurtzeko zehaztasunari eragingo dio, beraz, beharrezkoa da proteina, fenol, polisakarido eta polifenol hondakinak azido nukleikoen laginetan ahalik eta gehien saihestea.

Hala ere, hain zuzen ere, erreaktibo organikoekin erauztea metodo zaharra da.Kit komertzialetan, erauzketa-efektua zentrifugazioarekin konbinatutako silizean oinarritutako adsortzio-zutabe baten bidez lor daiteke, kentzen zailak diren erreaktibo organiko toxiko eta kaltegarriak saihestuz, etab. Arazoa, esaterako.Foregene-ren azido nukleikoaren erauzketa kitak ez ditu DNasa/RNasa eta erreaktibo organiko toxikorik erabiltzen operazio osoan, azkar eta seguru., etaefektua daona(kasualitatez esan zuen burusoila zela, baina badakit jakin nahi duzula).

1. adibidea: DNA genomikoaren erauzketa errendimendua eta purutasuna

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) hainbat iturritako lurzoru-laginak tratatzen ditu, eta lortutako DNA genomikoaren kantitatea eta purutasuna hurrengo taulan azaltzen dira:
2. adibidea: ehunen RNA erauzketa-errendimendua eta purutasuna

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) ehun-lagin desberdinak prozesatu zituen, eta lortutako RNAren kantitatea eta purutasuna beheko taulan agertzen dira (saguaren ehunetarako):
Hala ere, ez pentsa OD balioarekin amaitu duzunik.Zaindu al dituzu aurrealdean marraztu nizkizun puntu gakoak?

Oharra

Azido nukleiko molekula zatikatuak ere absorbantzian kalkulatuko dira.RNAn DNA genomikoaren hondakinak dituzula suposatuz, zure OD balioa oso altua izango da, baina ezin da zehaztu RNAren benetako kontzentrazioa.Zure RNA den ala ez. Ez dago argi degradazioa dagoen ala ez, beraz, oraindik ebaluazio metodo integral bat behar dugu epai zehatzagoa emateko, hau da, MIQEn aipatutako azido nukleikoen osotasunaren ebaluazioa.