Zer da mRNA txertoa
mRNA txertoak RNA transferitzen du gorputzeko zeluletara, proteina-antigenoak adierazteko eta ekoizteko, in vitro aldaketa garrantzitsuak egin ondoren, eta horrela gorputza antigenoaren aurkako erantzun immune bat ekoizten du, eta horrela gorputzaren immunitate-ahalmena zabalduz.[1,3].
1. irudia: mRNA txertoaren injekzio zuzenaren efektuaren diagrama eskematikoa [2]
mRNA txertoen sailkapena
mRNA txertoak bi motatan banatzen dira:ez errepikatzenmRNA etaautoanplifikatuzmRNA: autoanplifikatzen den mRNA xede-antigenoa ez ezik, zelula barneko RNA anplifikazioa eta proteina adierazpen mekanismoa ahalbidetzen duen erreplikazioa ere kodetzen du.Erreplikatzen ez diren mRNA txertoek xede-antigenoak soilik kodetzen dituzte eta 5' eta 3' itzultzen ez diren eskualdeak (UTR) dituzte.Egokigarritasunaren eta berezko immunitatearen estimulazio integrala eskaintzen dute, hots, in situ antigenoaren adierazpena eta arrisku-seinalearen transmisioa, eta aplikazio hauek dituzte Ezaugarriak[2,3]
●Egokigarritasunaren eta berezko immunitatea suspertzeko modu osoa eman dezake, hots, in situ antigenoaren adierazpena eta arrisku-seinalearen transmisioa.
●Erantzun immunologikoa "orekatua" eragin dezake, efektore umoralak eta zelularrak eta memoria immunologikoa barne
●Antigeno desberdinak konbina ditzake txertoaren formulazioaren konplexutasuna handitu gabe
● Potentzial immunologikoaren etengabeko hobekuntza lor daiteke behin eta berriz txertoen bidez, eta eramailearen erantzun immunerik ez dago edo gutxi.
●Beroan egonkorrak diren mRNA txertoek txertoen garraioa eta biltegiratzea erraztu dezakete
2. Irudia: mRNA txertoaren eta bere antigenoaren adierazpen-mekanismoaren diagrama eskematikoa [4]
mRNA txertoen ezaugarriak
Txerto tradizionalekin alderatuta, mRNA txertoek ekoizpen prozesu sinpleak dituzte, garapen-abiadura azkarrak, zelula-kulturaren beharrik ez eta kostu baxua dituzte.DNAren txertoekin alderatuta, mRNA txertoek ez dute nukleoan sartu behar eta ez dago ostalariaren genoman integratzeko arriskurik.Erdi-bizitza aldaketaren bidez doitu daiteke.
1. taula: mRNA txertoen abantailak eta desabantailak
|
| Abantaila | Gabezia |
| mRNA txertoa | Ikerketa eta garapen azkarra, txertoen ekoizpenak 40 egun besterik ez ditu behar | Alferrikako erantzun immunologikoa piztu
|
| Baldintza fisiologikoetan mRNA ezegonkortasuna, degradatzeko erraza | Ez da genoman integratuko mutazio terapeutiko posibleak saihesteko
| |
| Ez da inolako lokalizazio nuklear seinalerik behar, transkripzioa | Segurtasun nuklearraren eraginkortasuna egiaztatzeko dago
|
3. irudia: mRNA txertoaren ekoizpen eta prestaketaren fluxu-diagrama [4]
Foregene Viral RNA isolatzeko kit
RT-qPCR Erraza (Urrats Bat)
MRNA txertoak prestatzeko estrategiak hobetu
mRNA beraren egonkortasun eskasa dela eta, ehunetan nukleasen degradazio erraza, zelulen sarrerako eraginkortasun txikia eta itzulpen eraginkortasun txikia direla eta, akats hauek mRNA txertoen aplikazioa mugatzen dute.Itzulpen-eraginkortasunak ere zeregin oso kritikoa du.Bidalketa-ibilgailuak bektore biraletan eta bektore ez-biraletan bana daitezke (liposomak, liposomak ez direnak, birusak, nanopartikulak, etab. barne).Beraz, hobekuntza neurri egokiak behar dira.Honako hau mRNA prestatzeko farmakologia hobetzeko estrategia bat da[2]
1 Sintetiza ezazu kap analogoak edo erabili entzimak entzimak mRNA egonkortzeko eta proteina-itzulpena areagotzeko, itzulpen-hasierako faktore eukariotoaren 4E (EIF4E) lotuz.
2 Doitu 5′-itzul gabeko eskualdeko (UTR) eta 3′-UTRko elementuak mRNA egonkortzeko eta proteina itzulpena areagotzeko.
3 Poly(A) isatsa gehitzeak mRNA egonkortu eta proteinen itzulpena areagotu dezake
4 Nukleosido aldatuak berezko aktibazio immunea murrizteko eta itzulpena areagotzeko
5 RNasa III eta proteina azkarren kromatografia likidoaren (FPLC) arazketa bidezko tratamenduak aktibazio immunea murriztu eta itzulpena areagotu dezake.
6 Optimizatu sekuentziak edo kodoiak itzulpena areagotzeko
7 Itzulpenaren hasierako faktoreak eta itzulpena eta immunogenizitatea aldatzeko beste metodo batzuk batera ematea
4. Irudia: In vitro transkripzioa (IVT) mRNA ekoizteko eta muntatzeko prozesua [5]
ADN plasmidoaren eskala handian prestatzea
Plasmidoen DNAren arazketa, batez ere, RNA, zirkulu irekiko DNA endotoxina, ostalariaren proteina eta ostalariaren azido nukleikoa bezalako kutsatzaileak kentzen ditu eta normalean plasmido birkonbinatzailea E. coli bihurtzen du.E. coli-k dentsitate handiko hartzidura jasaten du, ondoren solido-likidoen bereizketa eta E. coli-ren bilketa.Ondoren, E. coli lisi alkalinoa, solido-likido zentrifugoaren bereizketa eta mikroiragazpena argitzea lisiaren ondoren, ultrairagazkia eta kontzentrazioa argitu ondoren, eta, ondoren, purifikazio kromatografikoa.
DNA plasmidoaren arazketa:
Foregene General Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, et al.mRNA txertoak - txertoen aro berri bat [J].Nature Reviews Drug Discovery, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Introduction to RNA Vaccines.In: Kramps T., Elbers K. (arg.) RNA Vaccines.Methods in Molecular Biology, vol 1499. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G, Zhang C, Li J, et al.mRNA gaixotasun infekziosoak kontrolatzeko txertoak garatzeko teknologia eraldatzaile gisa[J].Terapia Molekularra, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,mRNAren txertoa egokitzea berezko/moldagarria den erantzun immunologikoa orekatzeko,Trends in Molecular Medicine, 26. liburukia, 3.2020. alea, 311-323 orrialdeak.
Argitalpenaren ordua: 2021-05-05
