A260/A230-ren erlazio baxua 230 nm-ko xurgapen-uhin-luzera maximoa duten ezpurutasunek eragin ohi dute.Ikus dezagun zer barne hartzen duten ezpurutasun hauek:

• Kutsatzaile arruntak	Xurgapen-uhin-luzera	Ratio efektua
  Proteina	~230nm eta 280nm	A-ren aldi berean murriztea260/A 280eta A260/A 280ratioak
  Guanidina gatza	220-240 nm	Murriztu A260/A 280ratioa
  Fenola	~270nm	-
  Trizol	~230nm eta 270nm	Murriztu A260/A 280ratioa
  EDTA	~230nm	Murriztu A260/A 280ratioa
  Etanola	230-240 nm	Murriztu A260/A 280ratioa

 
 
 
Kutsatzaile arrunten xurgapen-uhin-luzera eta kontraste-balioa

Proteinaren kutsadura
Proteinen kutsadura azido nukleikoen erauzketa prozesuan ohikoena den kutsaduratzat har daiteke.Proteina goiko fase urtsuaren eta beheko fasearen artean dagoorganikoafasea .Kutsadurak A260/A280 eta A260/A230 erlazioa murriztuko du aldi berean, eta A260/A230 ratioa A260/A280 ratioa baino argiago aldatuko da.
Ondorengoanalderantzizko transkripzioaor qPCR erreakzioak, proteina-hondarrek entzimaren funtzioa inhibitu edo oztopatu dezakete.Proteinen kutsadura saihesteko modurik onena "gutxiago baino gehiago, kopuru txiki bat askotan" printzipioa kontuan hartzea da gainnatzailea aspiratzerakoan.

2. Guanidinioaren kutsadura
klorhidratoak (GuHCl) eta guanidina tiozianatoak (GTC) proteinak desnaturalizatzeko eragina dute, eta horrek azido nukleikoen erauzketa prozesuan zelulen mintzak azkar suntsi ditzakete, proteina desnaturalizazioa eta prezipitazioa eraginez.GuHCl eta GTCren xurgapen-uhin-luzera 220-240 nm artekoa da, etaHondar guanidinio-gatzak A260/A230 erlazioa murriztuko du.Hondar guanidinio gatzak ratioa murriztuko badu ere,beheko esperimentuetan eragina benetan arbuiagarria da.

3. Trizol kutsadura
Trizolaren osagai nagusia fenola da.Fenolaren funtzio nagusia zelulak lisatzea eta zeluletan proteinak eta azido nukleikoen substantziak askatzea da.Fenolak proteinak modu eraginkorrean desnaturalizatu ditzakeen arren, ezin du erabat inhibitu RNasaren jarduera.Hori dela eta, 8-hidroxiquinolina, guanidina isotiozianatoa, β-merkaptoetanola eta abar gehitzen zaizkio TRIzol-i RNasa endogenoa eta exogenoa inhibitzeko.
ARN zelularra ateratzen denean, Trizolek zelulak azkar lisatu ditzake eta zeluletatik askatutako nukleasa inhibitu dezake, eta hondarreko Trizolak A260/A230 ratioa nabarmen murriztuko du.
Prozesatzeko metodoa: Zentrifugatzean, kontuan izan behar da Trizol-en fenola erraz disolbagarria dela ur-fasean 4° eta giro-tenperaturan.

4. Etanol hondarra
Etanola azken prozesuan erabiltzen da DNA hauspeatzeko, DNAri lotu daitezkeen gatz ioiak disolbatzen dituen bitartean.Altuenaren xurgapen-uhin-luzeraren xurgapen gailurraetanola ere 230-240 nm-tan dago, hau daA260/A230 ratioa ere murriztuko du.
Etanol hondarrak saihesteko metodoa birritan errepika daiteke azken eluzioan, putz eginez.kanpaiabi minutuz etanola guztiz lurrun dadin eluziorako tampona gehitu aurretik.
Hala ere, jakin behar da ratioa RNA kalitatearen ebaluazio-indize bat baino ez dela.Aipatutako eragiketak zorrotz arautzen badira, ratioaren eta barruti estandarraren arteko desbideratzeak ez du eragin handirik izango beherako esperimentuetan.
Erlazionatutako produktuak:
Animalia Guztira RNA isolatzeko kit
Landare Guztira RNA isolatzeko kit
Zelula Guztira RNA isolatzeko kit
Landare Guztira RNA isolatzeko kit Plus