Animalien RNA osoa isolatzeko kit RNA osoa erauzteko eta arazteko kitak Animalien ehunetarako eta zeluletarako
Kitaren deskribapena:
Apurtasun handiko eta kalitate handiko RNA osoa erauzi azkar eta eraginkortasunez animalia-ehun ezberdinetatik.
Ez da kezkatu behar RNA degradazioaz.Sistema osoa RNaserik gabekoa da
Eraginkortasunez kendu DNA DNA-garbiketa zutabea erabiliz
Kendu DNA DNasa gehitu gabe
Sinplea: eragiketa guztiak giro-tenperaturan egiten dira
Azkar: eragiketa 30 minututan burutu daiteke
Segurua: ez da erreaktibo organikorik erabiltzen
Garbitasun handia-OD260/280≈1.8-2.1
Kiten deskribapenak
50 prestaketa, 200 prestaketa
Kit honek erabiltzen duspin zutabea eta formulagure enpresak garatutakoa, zeinak garbitasun handiko eta kalitate handiko RNA osoa atera dezake hainbat animalia-ehunetatik eraginkortasun handiarekin. DNA-Garbiketa-zutabe eraginkorra eskaintzen du, DNA genomikoa erraz bereizi eta xurga dezakeena gainditzailetik eta ehun-lisatutik, sinplea eta denbora aurrezteko;RNA-bakarrik Zutabeak RNA modu eraginkorrean lotu dezake eta aldi berean prozesatu daiteke formula berezi batekin Lagin asko.
Sistema osoa RNasarik gabekoa da, erauzitako RNA ez dadin degradatu;Buffer RW1, Buffer RW2 buffer garbiketa sistema, lortutako RNA proteina, DNA, ioi eta konposatu organikoen kutsadurarik gabe egon dadin.
Kitaren osagaiak
| Animalien RNA osoa isolatzeko kit | ||
| Kitaren osagaiak | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25 ml | 100ml |
| Buffer RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNasik gabeko ddH2O | 10ml | 40 ml |
| RNA-bakarrik Zutabea | 50 | 200 |
| DNA-Garbiketa Zutabea | 50 | 200 |
| Argibide eskuliburua | 1 pieza | 1 pieza |
Produktuaren informazioa
| Formatua | Spin zutabea | Arazketa osagaia | Foregene zutabea, erreaktiboa |
| Fluxua | 1-24 lagin | Prestaketa bakoitzeko denbora | ~30 min (24 lagin) |
| Zentrifugatzailea | Mahaigaineko zentrifugatzailea | Pirolisiaren bereizketa | Banaketa zentrifugoa |
| Lagina | Animalien ehuna;zelula | Laginen kopurua | Ehuna: 10-20 mg;Gelaxka: (1-5)×106 |
| Eluzio-bolumena | 50-200 μL | Gehienezko karga-bolumena | 850 μL |
Ezaugarriak eta abantailak
■ Ez da kezkatu behar RNA degradazioaz;sistema osoa RNasik gabekoa da
■ Eraginkortasunez kendu DNA erabiltzen duen DNA garbitzeko zutabea
■ Kendu DNA DNasa gehitu gabe
■ Eragiketa sinpleak giro-tenperaturan egiten dira
■ Eragiketa azkarra 30 minututan burutu daiteke
■ Seguru: ez da erreaktibo organikorik behar
■ Garbitasun handiko -OD260/280≈1.8-2.1
Kit aplikazioa
Egokia da animalia-ehun edo hazitako zelula fresko edo izoztuetatik RNA osoa ateratzeko eta arazteko.
Produktuaren parametroak
■ Beheko aplikazioak: lehen katearen cDNA sintesia, RT-PCR, klonazio molekularra, Northern Blot, etab.
■ Laginak: animalia-ehunak, hazitako zelulak
■ Dosia: Ehunak 10-20mg, Zelulak (2-5) × 106
■ Arazte-zutabearen DNA lotzeko ahalmen maximoa: 80 μg
■ Eluzio bolumena: 50-200 μl
Diagrama
Animalia guztira RNA isolatzeko kit tratatua 20 mg
Saguaren lagin freskoak, hartu %5 araztutako RNA totala %1 agar
Glikogel elektroforesia
1: Barea 2: Giltzurruna
3: Gibela 4: Bihotza
Biltegiratzea eta iraupena
Kita 24 hilabetez gorde daiteke giro-tenperaturan (15-25 ℃) edo 2-8 ℃ denbora luzeagoan.Buffer RL1 4 ℃-tan gorde daiteke hilabetez β-merkaptoetanola gehitu ondoren (aukerakoa).
Aipatu artikuluak
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.ARNm-kargatutako lipidoen antzeko nanopartikulak gibeleko oinarriak editatzeko, Central Composite Designaren optimizazioaren bidez.Adv.Funt.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Zelula ama terapeutikoen prestaketan zelulen apoptosi espontaneoak eragin immunomodulatzaileak eragiten ditu fosfatidilserina askatuz.Seinale Transduct Helburua Ther.2021eko uztailak 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.BADA: 17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA aldaketak mRNA onkogenikoaren itzulpena hobetzen du eta hepatiko barneko kolangiokarcinomaren progresioa sustatzen du.Mol Zelula.2021eko uztailak 29: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.BADA:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-bitartezatutako m6A aldaketak gibelaren birsorkuntza errazten du erretikulu endoplasmatikoa homeostasia mantenduz.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA isoaltion kit-ak beste lagin iturri batzukeskuragarri daude:
Zelula, landarea, birikoa, odola, etab.
RNA ez da erauzten edo RNA etekinak baxuak dira
Askotan, errekuperazio-eraginkortasuna eragiten duten hainbat faktore egon ohi dira, hala nola: ehun-laginaren RNA-edukia, funtzionamendu-metodoa, eluzio-bolumena, etab.
1. Funtzionamenduan izotz-bainua edo (4 °C) zentrifugazio kriogenikoa egin zen.
Gomendioa: giro-tenperaturan (15-25 º C) funtzionatzea prozesu osoan zehar, ez izoztu bainu eta zentrifugatu tenperatura baxuetan.
2. Laginak ezegoki kontserbatzea edo gehiegizko laginak biltegiratzeko denbora.
Gomendioa: gorde laginak -80 °C-tan edo izoztu nitrogeno likidoan eta saihestu izozte-desizozte errepikatu erabiltzea;saiatu ehun freskoa edo hazitako zelula erabiltzen RNA erauzketarako.
3. Laginaren lisi nahikoa.
Gomendioa: Ehuna homogeneizatzean, ziurtatu ehuna behar bezain homogeneizatuta dagoela eta ehun-zelulak behar adina zatituta daudela RNA-ren askapena azaltzeko.
4. Elutzailea ez da behar bezala gehitzen.
Gomendioa: berretsi RNaserik gabeko ddH dela2O tantaka gehitzen da arazketa-zutabearen mintzaren erdialdean.
5. Etanol absolutuaren bolumen zuzena ez zen gehitu Buffer RL2 edo Buffer RW2ra.
Gomendioa: Jarraitu argibideak, gehitu etanol absolutuaren bolumen zuzena Buffer RL2 eta Buffer RW2ra eta ondo nahastu kita erabili aurretik.
6. Ehun-laginaren dosia ez da egokia.
Gomendioa: Erabili 10-20 mg ehun edo (1-5) × 106500 μl buffer bakoitzeko zelulak RL1, ehunen gehiegizko erabilerak RNA erauzketa murriztu dezakeelako.
7. Eluzio bolumen desegokia edo eluzio osatugabea.
Gomendioa: arazketa-zutabearen eluzio-bolumena 50-200 μl da;eluzio-efektua egokia ez bada, giro-tenperaturan jartzeko denbora luzatzea gomendatzen da aurrez berotutako RNasarik gabeko ddH gehitu ondoren.2O, adibidez, 5-10 minutuz.
8.Arazte-zutabeak etanol-hondarrak ditu Buffer RW2 garbitu ondoren.
Gomendioa: Buffer RW2 garbitu ondoren etanol-hondakina badago, hodi hutsaren zentrifugazioa 1min, hodi hutsaren zentrifugazio-eragiketa egiteko denbora 2min arte handitu daiteke, edo arazketa-zutabea giro-tenperaturan jar daiteke 5 minutuz hondar-etanola behar bezala kentzeko.
RNA araztua degradatzen da
ARN araztuaren kalitatea laginaren kontserbazioa, RNasaren kutsadura eta manipulazioa bezalako faktoreekin lotuta dago.
1. Ehun-laginak ez dira garaiz gordetzen.
Gomendioa: bildu ondoren ehun-laginak edo zelulak garaiz erabiltzen ez badira, berehala kriokontserba -80 °C-tan edo nitrogeno likidoan.RNA ateratzeko, erabili hartu berri den ehun edo zelula lagin bat, ahal den guztietan.
2. Ehun-laginak behin eta berriz izoztu-desizoztea.
Gomendioa: Ehun-laginak gordetzean, hobe da zati txikitan moztea kontserbatzeko, eta erabiltzean piezaren bat kentzea, lagina behin eta berriz izozte-desizoztea eta RNA-aren degradazioa ekiditeko.
3. RNase sartzen da edo ez botatzeko eskularruak, maskarak etab.
Gomendioa: RNA erauzteko esperimentuak RNA manipulatzeko gela bereizietan egiten dira eta mahaia esperimentua baino lehen garbitzen da.
Erabili botatzeko eskularruak eta maskarak esperimentuan zehar, RNasa sartzeak eragindako RNA degradazioa minimizatzeko.
4. Erreaktiboak RNasarekin kutsatuta daude erabileran.
Gomendioa: ordezkatu animalien RNA totala isolatzeko kit berri batekin erlazionatutako esperimentuetarako.
5. RNA manipulazioan erabiltzen diren zentrifugatzaile-hodiak, puntak eta abar RNasarekin kutsatuta daude.
Gomendioa: RNA erauzketan erabiltzen diren zentrifugatzaile-hodiak, puntak, pipetak eta abar guztiak RNasik gabekoak direla.
Lortutako RNA araztuak beherako esperimentuei eragiten die
Arazketa-zutabearen bidez araztutako RNAk, gatz ioiak badira, proteina-edukia handiegia bada, beherako esperimentuan eragina izango du, hala nola: alderantzizko transkripzioa, Northern Blot et al.
1. Eluitutako RNAak gatz ioien hondarrak ditu.
Gomendioa: Berretsi etanol bolumen zuzena Buffer RW2-ra gehitu dela eta egin 2 arazketa-zutabe garbiketa funtzionatzeko adierazitako abiadura zentrifugoan;gatz-ioi hondarrik badago, utzi arazteko zutabea Buffer RW2-n 5 minutuz giro-tenperaturan eta egin zentrifugazioa gatz-kutsadura ahalik eta gehien kentzeko.
2. Etanol-hondarra elututako RNAn.
Gomendioa: berretsi buffer RW2 garbitu ondoren, egin hodi hutsaren zentrifugazio-eragiketa funtzionatzeko adierazitako zentrifugazio-abiaduran, handitu hodi hutsaren zentrifugazio-eragiketaren denbora 2 minutura arte oraindik etanol hondarra badago, edo utzi giro-tenperaturan 5 minutuz hodi hutsaren zentrifugazioaren ondoren, ethanolaren hondarra maximizatzeko.
