Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Zelula Lisis Zuzeneko Zelula Prest Urrats bakarreko qRT-PCR Kitak
Deskribapenak
Kit honek RT-qPCR erreakzioetarako hazitako zelulen laginetatik RNA azkar askatu dezakeen lisi-buffer-sistema berezia erabiltzen du, eta, horrela, denbora behar duen RNA arazteko prozesu neketsua ezabatzen da.RNA txantiloia 7 minututan lor daiteke.5×Zuzeneko RT Mix eta 2×Kitak eskaintzen dituen qPCR Mix-SYBR erreaktibo zuzenek denbora errealeko PCR emaitza kuantitatiboak azkar eta eraginkortasunez lor ditzakete.
5×Zuzeneko RT Mix eta 2×Zuzeneko qPCR Mix-SYBR-ek inhibitzaileen tolerantzia handia du, eta laginen lisatua RT-qPCRrako txantiloi gisa erabil daiteke zuzenean.Kit honek afinitate handiko Foregene alderantzizko transkriptasa eta D-Taq DNA polimerasa, dNTPs, MgCl ditu.2, erreakzio buffer, PCR optimizatzailea eta egonkortzailea.
Zehaztapenak
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kitaren osagaiak
| I. zatia | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| II. zatia | DNA ezabagailua |
| 5× RT nahasketa zuzena | |
| 2× Zuzeneko qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX erreferentziako tindagaia | |
| RNasik gabeko ddH2O | |
| Argibideak | |
Ezaugarriak eta abantailak
■Sinplea eta eraginkorra: Cell Direct RT teknologiarekin, RNA laginak 7 minututan lor daitezke.
■ Laginaren eskaria txikia da, 10 gelaxka bezain baxua proba daiteke.
■ Errendimendu handia: ARNa azkar hauteman dezake 384, 96, 24, 12, 6 putzuko plaketan hazitako zeluletan.
■ DNA Eraser-ek kaleratutako genomak azkar ken ditzake, eta geroko emaitza esperimentaletan eragina asko murrizten du.
■ RT eta qPCR sistema optimizatuak bi urratseko RT-PCR alderantzizko transkripzioa eraginkorragoa eta PCR zehatzagoa bihurtzen du, eta RT-qPCR erreakzio inhibitzaileekiko erresistenteagoa.
Kit aplikazioa
Aplikazio-esparrua: hazitako zelulak.
- Laginaren lisiaren bidez askatzen den RNA: kit honen RT-qPCR txantiloiari bakarrik dagokio.
- Kita helburu hauetarako erabil daiteke: gene-adierazpenaren analisia, siRNA bidezko gene isilarazteko efektua egiaztatzea, sendagaien baheketa, etab.
Diagrama
Biltegiratzea eta Iraupena
Kit honen I. zatia 4 ℃-tan gorde behar da;II zatia -20 ℃-tan gorde behar da.
Foregene Protease Plus II 4tan gorde behar da℃, ez izoztu -20 ℃-tan.
Erreaktiboa 2×Zuzeneko qPCR Mix-SYBR -20-tan gorde behar da℃iluntasunean;maiz erabiltzen bada, 4an ere gorde daiteke℃ epe laburreko biltegiratzeko (erabili 10 eguneko epean).
Denbora errealeko PCR lehen diseinuaren printzipioak
Aurrera eta Alderantzizko Primer
Denbora errealeko PCRrako, lehen diseinua oso garrantzitsua da.Primerak PCR anplifikazioaren espezifikotasunarekin eta eraginkortasunarekin lotuta daude, eta printzipio hauei erreferentzia eginez diseinatu daitezke:
Primer luzera: 18-30bp.
GC edukia: % 40-60.
Tm balioa: Primer diseinatzeko softwareak, Primer 5 adibidez, primeraren Tm balioa eman dezake.Goran eta beheran dauden primeren Tm balioak ahalik eta hurbilen egon behar dira.Tm kalkulu-formula ere erabil daiteke: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR egitean, 5 °C-ko primer Tm balioaren azpiko tenperatura hautatzen da, oro har, annealing-tenperatura gisa (dagokion errekuntza-tenperaturaren igoerak PCR erreakzioaren espezifikotasuna areagotu dezake).
Primerak eta PCR produktuak:
Diseinuaren hasierako PCR anplifikazio produktuaren luzera hobe da 100-150bp.
Ahal den neurrian saihestu behar dira txantiloiaren bigarren mailako egitura-eremuan diseinu-inprimaketak.
Saihestu 2 base osagarri edo gehiago sortzea urez gorako eta beheranzko primeren 3′ muturren artean.
Primer 3′ terminal-oinarria ezin da egon ondoz ondoko 3 G edo C gehigarrirekin.
Primerek berek ezin dute egitura osagarririk izan, bestela ilearen egitura bat sortuko da, PCR anplifikazioari eraginez.
ATCG lehen sekuentzian ahalik eta modu berdinean banatu behar da, eta 3′ oinarri terminala saihestu behar da T gisa.
1. eranskina: Cell Direct RT-qPCR Kit osagai osagarrien paketea
1.Zelula Lisiaren Soluzioa
|
| |||
| Kitaren osagaiak (24 putzu lisi sistema / putzu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| ZatiaI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ZatiaII | DNA ezabagailua | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT nahasketa
|
| |
| Kitaren osagaiak (20 μl erreakzio-sistema) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× RT nahasketa zuzena | 800 μl |
| RNasirik gabeko ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kitaren osagaiak (20 μl erreakzio-sistema) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Zuzeneko qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX erreferentziako tindagaia | 40 μl | 200 μl |
| RNasirik gabeko ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Argibide eskuliburuak:
