Buccal Swab/FTA Txartela DNA isolatzeko kit DNA genomikoa erauzteko edo arazteko kit buccal swabs
Kitaren deskribapena:
Azkar araztu kalitate handiko DNA genomikoa buccal swab/FTA Card laginetatik.
◮RNasen kutsadurarik ez:Kitak eskaintzen duen DNA-Soly Zutabeari esker, esperimentuan zehar DNA genomikotik RNA kentzea RNasa gehitu gabe, laborategia RNasa exogenoz kutsatzea eragotziz.
◮Abiadura azkarra:Foregene Proteasak antzeko proteasek baino jarduera handiagoa du, eta ehun-laginak azkar digeritzen ditu;eragiketa sinplea da, eta DNA genomikoaren erauzketa eragiketa 20-80 minututan burutu daiteke.
◮Komenigarria:Zentrifugazioa giro-tenperaturan egiten da, eta ez dago 4°C-ko tenperatura baxuko zentrifugaziorik edo DNAren etanol prezipitaziorik behar.
◮Segurtasuna:Ez da erreaktibo organikorik atera behar.
◮Goi mailako:Erauzitako DNA genomikoak zati handiak ditu, RNArik, RNasik ez eta ioi-eduki oso baxua du, hainbat esperimenturen eskakizunak bete ditzaketenak.
◮Mikro-eluzio-sistema:DNA genomikoaren kontzentrazioa areagotu dezake, hau da, beheran detektatzeko edo esperimentatzeko komenigarria.
Deskribapena
Kit honek metodo eraginkor eta azkarra eskaintzen du kontzentrazio handiko DNA genomikoa lortzeko buccal swabetatik eta FTA Txarteletatik (odol puntuetatik).Gure enpresa erabiliz's silize mintzaren biraketa-zutabe eta formula berezia, Foregene Proteasarekin konbinatuta, kontzentrazio handiko eta kalitate handiko DNA genomikoa 80 minututan atera daiteke.Bereziki diseinatutako arazteko zutabe txikiak DNA genomikoa lotzen du, eta DNA kantitate txiki batekin elu daiteke (15μl) eluzio-sistema lortutako DNA genomikoaren kontzentrazioa handitzeko, hau da, beheran detektatzeko edo esperimentatzeko komenigarria.Kitak lagin bat edo gehiago prozesatu ditzake aldi berean, eta arazketa-prozesuak ez du beharrezkoa substantzia organikorik ateratzea, hala nola fenola, kloroformoa eta isopropanol edo etanolaren prezipitazioa denbora asko eskatzen duena, eta eragiketa sinplea eta denbora aurreztea da.
Zehaztapenak
50 prestaketa
Kitaren osagaiak
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Akrilamida lineala |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Proteasa aurreko genea |
| DNA-Bakarrik Zutabea |
| Argibideak |
Ezaugarriak eta abantailak
-RNasen kutsadurarik ez: kitak eskaintzen duen DNA-Soly Zutabeari esker, DNA genomikotik RNA kentzea ahalbidetzen du esperimentuan zehar RNasa gehitu gabe, laborategia RNasa exogenoz kutsatzea saihestuz.
-Abiadura azkarra: Foregene Proteasak antzeko proteasak baino jarduera handiagoa du, laginak azkar digeritzen ditu;eragiketa sinplea.
-Erosoa: Zentrifugazioa giro-tenperaturan egiten da, eta ez da beharrezkoa 4°C-ko tenperatura baxuko zentrifugazioa edo DNAren etanola hauspeatzea.
-Segurtasuna: ez da erreaktibo organikorik atera behar.
-Kalitate handikoa: Ateratako DNA genomikoak zati handiak ditu, ez RNArik, ez RNasarik eta ioi-eduki oso baxua, hainbat esperimenturen eskakizunak bete ditzakeenak.
-Mikro-eluzio-sistema: DNA genomikoaren kontzentrazioa handitu dezake, eta hori komenigarria da beheran detektatzeko edo esperimentatzeko.
Kit aplikazioa
Honako lagin hauetatik ADN genomikoa arazteko egokia da: buccal swabs, FTA Card (odol orbanak).
Biltegiratzea eta Iraupena
-Kit hau 12 hilabetez gorde daiteke baldintza lehorrean giro-tenperaturan (15-25°C);denbora luzeagoan gorde behar bada, 2-8°C-tan gorde daiteke.
Oharra: tenperatura baxuan gordetzen bada, disoluzioa prezipitaziorako joera du.Erabili aurretik, ziurtatu soluzioa kitean jartzen duzula giro-tenperaturan denbora tarte batez.Beharrezkoa izanez gero, berotu aurretik 37 °C-ko ur-bainuan 10 minutuz prezipitatua desegiteko, eta nahastu erabili aurretik.
-Foregene Protease soluzioak formula berezia du, giro-tenperaturan denbora luzez (3 hilabete) gordetzen denean aktiboa dena;bere jarduera eta egonkortasuna hobeak izango dira 4°C-tan gordetzean, beraz, 4°C-tan gordetzea gomendatzen da, gogoratu -20°C-tan ez edukitzea.
Arazketa-zutabea beteta dago
Kit honetan, DNA genomikoaren erauzketa-eragiketan, arazketa-zutabea zuzenean xurgatzen da laginaren lisi entzimatikoaren nahasketa zentrifugazio-urratsik gabe, eta arazketa-zutabea blokeatu egin daiteke entzimizazio osatugabea eta laginaren biskositate handia dela eta.
Kausa posible hauek hauek dira:
1. Ehun-laginen digestio entzimatiko osatugabea.
Gomendioa: Foregene Proteasaren laginak prozesatzeko denbora behar bezala luza daiteke edo gainnadantea 12.000 rpm-an (~13.400 × g) zentrifugazioaren ondoren har daiteke 5 minutuz.
2. Ehun-laginak edo ehun handiak gehiegi erabiltzea.
Gomendioa: Hobe da laginean Buccal swab 1 ez gainditzea;lagina handiegia bada, handitu Buffer ST1, Foregene Protease, Buffer ST2 dosia.
3. Laginaren biskositatea altuegia da.
Gomendioa: laginak behar bezala diluitu daitezke Tris-HCl 10 mMrekin DNA genomikoa atera aurretik.
4. Odol txartelaren zatiak zurrupatu dira.
Gomendioa: odol-orbanaren (FTA Txartela) erauzketa genomikoaren 6. urratseko zentrifugazio denbora iragankorra behar bezala luzatu daiteke.
Etekin baxua edo DNArik ez
Askotan, DNA genomikoaren errendimenduan eragina duten hainbat faktore daude, besteak beste, laginaren jatorria, laginak biltegiratzeko baldintzak, laginak prestatzea, manipulazioa, etab.
ADN genomikoa ezin da erauzketan lortu
Kausa posibleak hauek dira:
1. Laginak desegoki kontserbatzeak edo denbora gehiegi gordetzeak DNA genomikoaren degradazioa dakar.
Gomendioa: Ahozko laginak lagin berriak hartu behar dira, eta ez da gomendagarria DNA genomikoaren erauzketa eragiketetarako kontserbatutako laginak erabiltzea;odol lekuen laginek kalitatea kualifikatua dela ziurtatu behar dute eta biltegiratze-denbora ez dela luzeegia izan behar.
2. Ehun gutxiegi erabiltzeak dagokion DNA genomikorik ez ateratzea eragin dezake.
Gomendioa: Jarraitu eragiketa-gidako zirriborroa lagintzeko argibideei, eta garbitu ahalik eta aldi gehienetan, DNA genomikoa ateratzeko ahozko laginketari zelula nahikoa erantsi ahal izateko;odol-orbanen laginak ateratzeko, odol-puntuen ebaketa-eremua egoki handitu daiteke.
3. Foregene Proteasa desegoki kontserbatzen da, eta horren ondorioz bere jarduera gutxitu edo inaktibatzen da.
Gomendioa: Berretsi aurreko Proteasaren biltegiratze-baldintzak edo ordeztu aurreko Proteasa berri batekin erreakzio entzimatikorako.
4. Kitaren kontserbazio desegokia edo biltegiratze denbora luzeegia da, eta ondorioz kitaren osagai batzuen hutsegitea da.
Gomendioa: erosi Buccal swab DNA isolatzeko kit berri bat erlazionatutako prozeduretarako.
5. Buffer WB-k ez du etanol absoluturik gehitzen.
Gomendioa: baieztatu WB tamponak etanol absolutuaren bolumen zuzena gehitzen duela.
6. Eluiatzailea ez da behar bezala gehitzen silikonazko filmari.
Gomendioa: Gehitu 65 °C aurrez berotutako eluante tanta silikonazko mintzaren erdian eta utzi giro-tenperaturan 5 minutuz eluzioaren eraginkortasuna areagotzeko.
Errendimendu baxuko DNA genomikoa isolatua
Kausa posible hauek hauek dira:
1. Laginak desegoki kontserbatzeak edo denbora gehiegi gordetzeak DNA genomikoaren degradazioa dakar.
Gomendioa: Ahozko laginak hobe lagin berriak dira, eta kontserbatutako laginak ez dira erabili behar DNA genomikoa erauzteko.
2. Ehun-lagin kopurua txikiegia bada, ateratako DNA genomikoaren edukia txikiagoa izango da.
Gomendioa: Jarraitu funtzionamendu-gidako ahozko laginak lagintzeko jarraibideei, ahalik eta gehien garbitu, DNA genomikoa ateratzeko ahozko laginak zelula nahikoa erantsi ahal izateko.
3. Foregene Proteasa desegoki kontserbatzen da, eta horren ondorioz bere jarduera gutxitu edo inaktibatzen da.
Gomendioa: Berretsi aurreko Proteasaren biltegiratze-baldintzak edo ordeztu aurreko Proteasa berri batekin erreakzio entzimatikorako.
4. Eluente-arazoak.
Gomendioa: Erabili Buffer EB eluzioa egiteko;ddH erabiliz gero2O edo beste eluante batzuk, baieztatu eluatuaren pHa 7,0-8,5 artean dagoela.
5. Eluatua ez da behar bezala gehitzen tantaka.
Gomendioa: Gehitu eluante-tantak silikonazko mintzaren erdian eta utzi giro-tenperaturan 5 minutuz eluzioaren eraginkortasuna areagotzeko.
6. Eluzio-likidoa gutxiegi pilatzen da.
Gomendioa: Erabili eluiatzailea DNA genomikoaren eluzioa egiteko argibideetan eskatzen den moduan, gutxienez 15 μl baino gutxiago.
Isolatutako DNA genomikoaren purutasun baxua
DNA genomikoaren garbitasun baxuak beheranzko esperimentuen porrota edo emaitza desegokiak ekar ditzake, hala nola: entzimak ezin dira ireki, PCR-k ezin du interesgarri den gene zatia lortu, etab.
Kausa posibleak hauek dira:
1. Heteroproteinen kutsadura, ARNaren kutsadura.
Analisia: arazketa-zutabea ez zen Buffer PW erabiliz garbitu;Buffer PW garbiketa arazteko zutabea ez zen zentrifugo abiadura egokia erabiliz garbitu.
Gomendioa: gainnadantean prezipitaziorik ez dagoela ziurtatu etanola gehitu aurretik;ziurtatu garbiketa-zutabea argibideen arabera garbitzen duzula, eta urrats hau ezin da alde batera utzi.
2. Ioien kutsadura kutsadura.
Analisia: Buffer WB garbiketa-arazketa-zutabea behin bakarrik utzi edo garbitu zen, eta ondorioz, hondar kutsadura ionikoa sortu zen.
Gomendioa: Ziurtatu Buffer WB 2 aldiz garbitu behar den bezala, hondar ioiak ahalik eta gehien kentzeko.
3. RNA entzimaren kutsadura.
Analisia: Atzerriko RNasak bufferra gehitu ziren;Buffer PW garbiketa-eragiketa okerra izan zen, eta RNasaren hondakinak sortu ziren, eta beheranzko RNAren eragiketa esperimentaletan eragina izan zuten, in vitro transkripzioa adibidez.
Gomendioa: Foregene serieko azido nukleikoen isolamendu-kitek RNA ken dezakete RNasa gehigarririk gabe, beraz, buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit-ek ez du RNasa gehitu behar;ziurtatu Buffer PW garbiketa-arazketa-zutabearen argibideak jarraitzen dituzula, eta urrats hau ezin da baztertu.
4. Etanol hondarra.
Analisia: Buffer WB-k ez zuen hodi hutsaren zentrifugazioa egin arazte-zutabea garbitu ondoren.
Gomendioa: Egin hodi hutsen zentrifugazio eragiketa zuzena argibideen arabera.
5. Beste ezpurutasunen kutsadura.
Analisia: gordetako laginak edo lagin bereziak ez dira aurrez tratatzen.
Gomendioa: ondo tratatu lagina agindu bezala.
