Escherichia coli O157:H7 azido nukleikoa detektatzeko kit (PCR zunda fluoreszentearen metodoa)
Kitaren deskribapena:
Cat.No.FP102
E. coli O157:H7 azkar hautemateko eta bahetzeko erabiltzen da elikagaietan, pentsuetan, ur-laginetan eta ingurumen-laginetan.
Deskribapenak
E. coli O157:H7 azkar hautemateko eta bahetzeko erabiltzen da elikagaietan, pentsuetan, ur-laginetan eta ingurumen-laginetan.
[Proba printzipioa]PCR fluoreszentearen teknologiaren printzipioaren arabera, abiarazle espezifikoak eta Taqman zundak Escherichia coli O157: H7 gene espezifikorako diseinatuta daude, eta PCR fluoreszente tresna batek detektatzen dira, Escherichia coli O157: H7 DNAren detekzio kualitatiboa detektatzeko.
Kitaren edukia
Oharra: ROX kanalaren zunda ez dago barne.
| Caurkariak | Zehaztapena | Qunitatea |
| Buffer A | Hodia | 1 |
| Buffer B | Hodia | 1 |
| Kontrol positiboa | Hodia | 1 |
| Kontrol negatiboa | Hodia | 1 |
Esperotako Erabilera
Horretarako erabiltzen da E. coli O157:H7 azkar hautematea eta bahetzea elikagaietan, pentsuetan, ur-laginetan eta ingurumen-laginetan.
Biltegiratze-baldintzak eta iraungitze-data
Gorde -20 ℃-tan iluntasunean eta saihestu behin eta berriz izozteak eta desizozteak.
Baliozko epea 12 dahilabeteak, eta ekoizpen-data kanpoko ontzian agertzen da.
Tresnak Eta Kontsumigarriak
PCR kuantitatibo fluoreszenteko tresna, pipeta-pistola eta bat datozen puntak, zurrunbilo-astingailua, mini zentrifugatzailea.
Erabilera
1. Laginaren tratamendua
1.1 Lagin mota: Kit hau egokia da Escherichia coli O157:H7-k kutsatuta daudela susmatzen duten elikagaiak, pentsuak, ur-laginak eta beste lagin batzuetarako.Prozesatutako haragi-produktu, edari eta pigmentuak dituzten bestelako substantzietan, garbitu egin behar dira fluoreszentzia-seinaleen bilketan eraginik ez izateko.
1.2 Laginak prozesatzea: ikusi "GB 4789.10-2016 Elikagaien Segurtasun Estandar Nazionala Elikagaien Azterketa Mikrobiologikoa Escherichia coli O157: H7 Test" laginak prestatzeko, aberasteko kultura eta Escherichia coli O157: H7 isolatzeko.
- Nazido ukleikoa erauztea
Hartu 20 ml aberaste-disoluzio 1,5 ml-ko zentrifugatzaile-hodi batean, gehitu 200 μL mikrobio-lisatu (kit osagarria behar da), zurrunbiloa 30 segundoz, zentrifugatu laburki eta alde batera utzi.
Oharrak: lisatutik azido nukleikoaren erauzketa 10 minututan amaitu behar da, eta ezin da denbora luzez gorde.
3. Azido Nukleikoen Anplifikazioa
3.1 Piztu PCR kuantitatibo fluoreszentea erabiltzeko.
Kitko A eta B tampona, urtu ondo, eta zentrifugatu labur.Gehitu 18 μL Buffer A eta 2 μL Buffer B PCR erreakzio-hodi bakoitzean.Ondoren, gehitu 5 ml kontrol negatiboa, ateratako azido nukleikoa eta kontrol positiboa PCR erreakzio-hodietan, tapatu hodiak eta zentrifugatu labur.
3.3 Transferitu PCR erreakzio-hodia PCR makina fluoreszente batera, eta erabili prozedura hauek anplifikazio-esperimentuak egiteko: hautatu 25 ml erreakzio-sistemarako, bildu fluoreszentzia-seinaleak 60 °C-tan ziklo bakoitzeko eta hautatu FAM detekzio-kanalerako.
| Urratsa | Programa | Ziklo kopurua |
| 1 | 37 ℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 40 |
| 60 ℃ 30s (bildu fluoreszentzia) |
Arazoak aztertzeko gidak
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Ezin da RNArik atera edo azido nukleikoaren etekina baxua da
Berreskurapen-eraginkortasuna eragiten duten faktore asko izan ohi dira, hala nola: laginaren RNA edukia, funtzionamendu-metodoa, eluzio-bolumena, etab.
Kausa arrunten analisia:
1.Izotz-bainua edo tenperatura baxuko (4 º C) zentrifugazioa funtzionamenduan zehar.
Iradokizuna: giro-tenperatura (15-25 º C) funtzionamendua, inoiz izotz-bainua eta tenperatura baxuko zentrifugatzailea.
2. Laginak biltegiratzea desegokia edo denbora gehiegiz gordetzea.
Iradokizuna: gorde laginak -80 º C-tan edo izoztu nitrogeno likidoan, eta saihestu izozte-desizoztu behin eta berriz erabiltzea;saia zaitez bildu berri diren laginak erabiltzen RNA erauzteko.
3.Laginaren lisi nahikoa
Gomendioa: ziurtatu lagina eta lan-disoluzioa (Akrilamida lineala) ondo nahastu direla eta 10 minutuz giro-tenperaturan (15-25 ºC) inkubatu direla.
4.Eluentea gaizki gehitu da
Gomendioa: Ziurtatu RNasarik gabeko ddH2O arazte-zutabearen mintzaren erdian gehitzen dela.
5.Etanol anhidroaren bolumen desegokia Buffer viRW2n
Iradokizuna: jarraitu argibideak, gehitu etanol anhidroaren bolumen egokia Buffer viRW2-ra eta nahastu ondo kit-a erabili aurretik.
6.Laginaren erabilera desegokia.
Iradokizuna: 200μl lagin Buffer viRL 500μl bakoitzeko.Gehiegizko laginaren bolumenak RNA erauzketa-tasa murriztuko du.
7.Eluzio bolumen desegokia edo eluzio osatugabea.
Iradokizuna: arazketa-zutabearen eluente-bolumena 30-50μl da;eluzio-efektua asegarria ez bada, aurrez berotutako RNaserik gabeko ddH gehitzea gomendatzen da.2O eta luzatu denbora giro-tenperaturan jarriz, esate baterako, 5-10min
8.Purification zutabeak etanol hondarrak ditu Buffer viRW2-n garbitu ondoren.
Iradokizuna: Buffer viRW2-n garbitu ondoren etanola oraindik geratzen bada eta 2 minutuz hodi hutsaren zentrifugazioan, arazte-zutabea giro-tenperaturan utzi daiteke 5 minutuz hodi-hutsean zentrifugatu ondoren, gainerako etanola guztiz kentzeko.
Araztutako RNA molekulen degradazioa
RNA araztuaren kalitatea laginak biltegiratzea, RNasaren kutsadura eta funtzionamendua bezalako faktoreekin lotuta dago.
Kausa arrunten analisia:
1. Bildutako laginak ez ziren garaiz gorde.
Iradokizuna: lagina jaso eta gero garaiz erabiltzen ez bada, gorde ezazu berehala -80 ℃ edo nitrogeno likidoan.RNA molekulak erauzteko, saiatu bildu berri diren laginak erabiltzen ahal den guztietan.
2.Bildutako laginak izoztu eta desizozten ari ziren behin eta berriz.
Iradokizuna: saihestu behin baino gehiagotan izoztea eta desizoztea (behin baino gehiagotan) laginak jaso eta biltegiratu bitartean, bestela azido nukleikoaren etekina gutxituko da.
3.RNasa ebakuntza-gelan sartu zen edo ez zen erabili eta botatzeko eskularrurik, maskararik, etab.
Iradokizuna: RNA molekulen esperimentua RNAren operazio-gela bereizi batean egiten da onena, eta mahai esperimentala garbitzen da esperimentua baino lehen.Erabili botatzeko eskularruak eta maskarak esperimentuan zehar, RNasa sartzeak eragindako RNA degradazioa saihesteko.
4.Erreaktiboa RNasarekin kutsatuta dago erabileran zehar.
Iradokizuna: Ordeztu RNA Biralaren Isolaketa Kit berriarekin erlazionatutako esperimentuetarako.
5.Hodi zentrifugatzaileen, pipeten punten, etab. RNasen kutsadura. Iradokizuna: Ziurtatu zentrifugatzaileen hodiak, pipetaren puntak eta pipetak RNasik gabekoak direla.
Araztutako RNA molekulek beherako esperimentuetan eragina izan zuten
Purifikazio-zutabeak araztutako RNA molekulek beherako esperimentuetan eragina izango dute gatz ioi edo proteina gehiegi baldin badaude, hala nola: alderantzizko transkripzioa, Northern Blot, etab.
1.Elututako RNA molekulen gainerako gatz ioiak daude.
Gomendioa: Ziurtatu Buffer viRW2-ra etanol anhidroaren bolumen egokia gehitu dela eta garbitu arazketa-zutabea birritan funtzionamendu-argibideetako zentrifugazio-abiadura zuzenaren arabera; oraindik gatz-ioiak geratzen badira, Buffer viRW2 gehi dezakezu arazketa-zutabean eta utzi giro-tenperaturan 5 minutuz.Ondoren, egin zentrifugazioa gatz ioien kutsadura neurririk handiena kentzeko
2.Elututako RNA molekulen etanola geratzen da
Iradokizuna: arazketa-zutabeak Buffer viRW2 bidez garbitu direla baieztatu ondoren, egin hodi hutsaren zentrifugazioa funtzionamendu-argibideetako abiadura zentrifugoaren arabera.Oraindik etanola geratzen bada, 5 minutuz utzi daiteke giro-tenperaturan hodi hutsaren zentrifugazioa egin ondoren, gainerako etanola neurririk handiena kentzeko.
Argibide eskuliburuak:
Viral RNA Isolation Kit Argibide Eskuliburua
