(96 putzu) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
Deskribapenak
The(96-ondo) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Berdea Ieskaintzen dulisi-buffer sistema bereziato RNA azkar askatuhazitako zelulatikRT-qPCR erreakzioetarako laginak, denbora asko eta neketsuak ezabatuzRNA arazteko prozesua, eta 7 minutu baino ez ditu behar beharrezko RNA txantiloia lortzeko.The5× RT nahasketa zuzenaeta2× Zuzeneko qPCR Mix-SYBRkutxan emandako azkar etadenbora errealean kuantitatiboak modu eraginkorrean lortuPCR emaitzak.
5× Direct RT Mix eta 2× Direct qPCR Mix-SYBR-ek inhibitzaileen tolerantzia handia dute, eta probatu beharreko laginaren lisatoa txantiloi gisa erabil dezakete alderantzizko transkripzio eraginkorra eta anplifikazio espezifikorako.Erreaktiboak Foregene Alderantzizko Transkriptasa berezia dauka RNArekiko afinitate handikoa, baita Hot D-Taq DNA Polimerasa, dNTPs, MgCl ere.2 , erreakzio-buffer, PCR optimizatzailea eta egonkortzailea, eta lisi-bufferarekin batera erabil daiteke lagina azkar, erraz eta zehaztasunez detektatzeko, eta sentsibilitate handiko, espezifikotasun sendoko eta egonkortasun oneko ezaugarriak ditu.
Kitak 96 ondo hazitako zelulen mikrosistemaren lisiari zuzenduta dago, eta uniformetasun eta koherentzia ona du;Kitaren osagaiek 96 lisi erreakzio, 96 alderantzizko transkripzio erreakzio eta 96 × 2 qPCR erreakzio eskaintzen dituzte, 96 putzuko zelulen plaka behin-behinean erabiltzeko, erreaktiboak behin eta berriz ireki, izozteak eta desizozteak eragindako kutsadura eta erreaktiboen errendimenduaren degradazioa saihestuz.
Kitaren osagaiak
| Kitaren konposizioa ( 50 μL lisi sistema/20 μLRT erreakzio-sistema /20μL qPCR erreakzio-sistema) | DRT-03011 | Oharra | |
| 96T | |||
| ZatiaI | BufferCL | 5 ml | ZelulaLisia |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Zatia II | DNAEzabagailua | 100 μL | |
| 5× RT nahasketa zuzena | 400 μL | RT | |
| 2 × qPCR nahasketa zuzena-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX erreferentziako tindagaia | 400µL | ||
| RNasa- DoanddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Murteko | 1 pieza | 1 anoa | |
*: Lisi erreaktiboa DNA Eraser kitaren II zatian sartzen da;Cell Lysis, RT eta qPCR osagaiak bereiz eros daitezke.
Ezaugarriak eta abantailak
■Sinplea eta eraginkorra: Cell Direct RT teknologiarekin, RNA laginak 7 minututan lor daitezke.
■ Laginaren eskaria txikia da, 10 gelaxka bezain baxua proba daiteke.
■ Errendimendu handia: ARNa azkar hauteman dezake 384, 96, 24, 12, 6 putzuko plaketan hazitako zeluletan.
■ DNA Eraser-ek kaleratutako genomak azkar ken ditzake, eta geroko emaitza esperimentaletan eragina asko murrizten du.
■ RT eta qPCR sistema optimizatuak bi urratseko RT-PCR alderantzizko transkripzioa eraginkorragoa eta PCR zehatzagoa bihurtzen du, eta RT-qPCR erreakzio inhibitzaileekiko erresistenteagoa.
Kit aplikazioa
Aplikazio-esparrua: hazitako zelulak.
- Laginaren lisiaren bidez askatzen den RNA: kit honen RT-qPCR txantiloiari bakarrik dagokio.
- Kita helburu hauetarako erabil daiteke: gene-adierazpenaren analisia, siRNA bidezko gene isilarazteko efektua egiaztatzea, sendagaien baheketa, etab.
Biltegiratzea eta Iraupena
Kit honen I. zatia 4an gorde behar da℃;II zatia -20 ℃-tan gorde behar da.
Foregene Protease Plus II 4tan gorde behar da℃, ez izoztu -20 ℃-tan.
Erreaktiboa 2×Zuzeneko qPCR Mix-Taqman -20-tan gorde behar da℃iluntasunean;maiz erabiltzen bada, 4an ere gorde daiteke℃ epe laburreko biltegiratzeko (erabili 10 eguneko epean).
Denbora errealeko PCR lehen diseinuaren printzipioak
Aurrera eta Alderantzizko Primer
Denbora errealeko PCRrako, lehen diseinua oso garrantzitsua da.Primerak PCR anplifikazioaren espezifikotasunarekin eta eraginkortasunarekin lotuta daude, eta printzipio hauei erreferentzia eginez diseinatu daitezke:
- Primer luzera: 18-30bp.
- GC edukia: % 40-60.
- Tm balioa: Primer diseinatzeko softwareak, Primer 5 adibidez, primeraren Tm balioa eman dezake.Goran eta beheran dauden primeren Tm balioak ahalik eta hurbilen egon behar dira.Tm kalkulu-formula ere erabil daiteke: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR egitean, 5 °C-ko primer Tm balioaren azpiko tenperatura hautatzen da, oro har, annealing-tenperatura gisa (dagokion errekuntza-tenperaturaren igoerak PCR erreakzioaren espezifikotasuna areagotu dezake).
- Primerak eta PCR produktuak:
- Diseinuaren hasierako PCR anplifikazio produktuaren luzera hobe da 100-150bp.
- Ahal den neurrian saihestu behar dira txantiloiaren bigarren mailako egitura-eremuan diseinu-inprimaketak.
- Saihestu 2 base osagarri edo gehiago sortzea urez gorako eta beheranzko primeren 3′ muturren artean.
- Primer 3′ terminal-oinarria ezin da egon ondoz ondoko 3 G edo C gehigarrirekin.
- Primerek berek ezin dute egitura osagarririk izan, bestela ilearen egitura bat sortuko da, PCR anplifikazioari eraginez.
- ATCG lehen sekuentzian ahalik eta modu berdinean banatu behar da, eta 3′ oinarri terminala saihestu behar da T gisa.
eranskina1: Cell ZuzenaRT-qPCR Kit osagaiat osagarri paketea
1.Zelulen Lisi Soluzioa
| Zelula Lisiaren Soluzioa | |||
| Kitaren osagaiak (24 putzu lisi sistema / putzu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| ZatiaI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ZatiaII | DNA ezabagailua | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT nahasketa | |
| Kitaren osagaiak (20 μl erreakzio-sistema) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× RT nahasketa zuzena | 800 μl |
| RNasirik gabeko ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR nahasketa | ||
| Kitaren osagaiak (20 μl erreakzio-sistema) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × zuzeneko qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Erreferentzia Tindagai | 40 μl | 200 μl |
| RNasirik gabeko ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Argibide eskuliburuak:
