Anplifikazio seinalerik ez

1.Kitaren Taq DNA Polimerasak bere jarduera galtzen du kitaren biltegiratze desegokiagatik edo iraungitzeagatik.
Gomendioa: berretsi kitaren biltegiratze-baldintzak;gehitu berriro Taq DNA polimerasa kopuru egoki bat PCR sistemara edo erosi denbora errealeko PCR kit berri bat erlazionatutako esperimentuetarako.

2.ADN txantiloian Taq DNA Polimerasaren inhibitzaile asko daude.
Iradokizuna: txantiloia birraztu edo erabilitako txantiloi kopurua murriztu.

3.Mg2+ kontzentrazioa ez da egokia.
Gomendioa: eskaintzen dugun 2× Real PCR Mixaren Mg2+ kontzentrazioa 3,5 mM da.Hala ere, lehen eta txantiloi berezi batzuetarako, Mg2+ kontzentrazioa handiagoa izan daiteke.Hori dela eta, zuzenean MgCl2 gehi dezakezu Mg2+ kontzentrazioa optimizatzeko.Optimizatzeko aldi bakoitzean Mg2+ 0.5mM handitzea gomendatzen da.

4.PCR anplifikazio-baldintzak ez dira egokiak, eta primer-sekuentzia edo kontzentrazioa desegokia da.
Iradokizuna: berretsi abiarazlearen sekuentziaren zuzena eta abiarazlea ez dela degradatu;anplifikazio-seinalea ona ez bada, saiatu erretiro-tenperatura jaisten eta lehen-kontzentrazioa egoki egokitzen.

5. Txantiloi kopurua gutxi edo gehiegi da.
Gomendioa: Egin txantiloiaren linealizazio-gradientearen diluzioa eta hautatu denbora errealeko PCR esperimenturako PCR efektu onena duen txantiloiaren kontzentrazioa.

NTC fluoreszentzia balio handiegia du

1.Erreaktiboen kutsadura funtzionamenduan eragindakoa.
Gomendioa: Ordeztu denbora errealeko PCR esperimentuetarako erreaktibo berriekin.

2.PCR erreakzio-sistema prestatzerakoan kutsadura gertatu da.
Gomendioa: Hartu behar diren babes-neurriak funtzionatzerakoan, hala nola: latexezko eskularruak jantzita, iragazkidun pipeta-punta erabiltzea, etab.

3.Primerak degradatu egiten dira, eta abiarazleak degradatzeak anplifikazio ez-espezifikoa eragingo du.
Iradokizuna: Erabili SDS-PAGE elektroforesia abiarazleak degradatuta dauden ala ez detektatzeko, eta ordeztu lehengai berriekin Denbora errealeko PCR esperimentuetarako.

Primer dimeroa edo anplifikazio ez-espezifikoa

1.Mg2+ kontzentrazioa ez da egokia.
Gomendioa: eskaintzen dugun 2× Real PCR EasyTM Mixaren Mg2+ kontzentrazioa 3,5 mM da.Hala ere, lehen eta txantiloi berezi batzuetarako, Mg2+ kontzentrazioa handiagoa izan daiteke.Hori dela eta, zuzenean MgCl2 gehi dezakezu Mg2+ kontzentrazioa optimizatzeko.Optimizatzeko aldi bakoitzean Mg2+ 0.5mM handitzea gomendatzen da.

2.PCR annealing tenperatura baxuegia da.
Iradokizuna: handitu PCR errekostatzeko tenperatura 1 ℃ edo 2 ℃ bakoitzean.

3.PCR produktua luzeegia da.
Gomendioa: Denbora errealeko PCR produktuaren iraupena 100-150 bp artekoa izan behar du, ez 500 bp baino gehiago.

4.Primerak degradatu egiten dira, eta abiarazleen degradazioak anplifikazio espezifikoa agertzea ekarriko du.
Iradokizuna: Erabili SDS-PAGE elektroforesia abiarazleak degradatuta dauden ala ez detektatzeko, eta ordeztu lehengai berriekin Denbora errealeko PCR esperimentuetarako.

5.PCR sistema desegokia da, edo sistema txikiegia da.
Iradokizuna: PCR erreakzio-sistema txikiegia izateak detekzio-zehaztasuna gutxituko du.Hobe da PCR kuantitatiboko tresnak gomendatutako erreakzio-sistema erabiltzea Real Time PCR esperimentua berriro exekutatzeko.

Balio kuantitatiboen errepikakortasun eskasa

1. Tresna gaizki funtzionatzen ari da.
Iradokizuna: akatsak egon daitezke tresnaren PCR zulo bakoitzaren artean, tenperaturaren kudeaketan edo detekzioan erreproduzigarritasun eskasa eraginez.Mesedez, egiaztatu dagokion tresnaren argibideen arabera.

2.Laginaren garbitasuna ez da ona.
Gomendioa: lagin ezgabeek esperimentuaren erreproduzigarritasun eskasa ekarriko dute, txantiloiaren eta lehengaien purutasuna barne.Hobe da txantiloia birraztea, eta lehengaiak SDS-PAGE bidez garbitzen dira.

3.PCR sistema prestatzeko eta biltegiratzeko denbora luzeegia da.
Iradokizuna: Erabili denbora errealeko PCR sistema PCR esperimenturako prestatu eta berehala, eta ez utzi denbora luzez alde batera utzita.

4.PCR anplifikazio-baldintzak ez dira egokiak, eta primer-sekuentzia edo kontzentrazioa desegokia da.
Iradokizuna: berretsi abiarazlearen sekuentziaren zuzena eta abiarazlea ez dela degradatu;anplifikazio-seinalea ona ez bada, saiatu erretiro-tenperatura jaisten eta lehen-kontzentrazioa egoki egokitzen.

5.PCR sistema desegokia da, edo sistema txikiegia da.
Iradokizuna: PCR erreakzio-sistema txikiegia izateak detekzio-zehaztasuna gutxituko du.Hobe da PCR kuantitatiboko tresnak gomendatutako erreakzio-sistema erabiltzea Real Time PCR esperimentua berriro exekutatzeko.