Zuzeneko RT-qPCR Kit III
Kitaren deskribapena:
◮RT-qPCR Kit zuzenak, Foregene-k garatzen duen Foreasy Reverse Transcriptase eta Foreasy HS Taq DNA polimerasa erabiliz, erreakzio buffer bereziarekin, kit hau erresistentzia eta bateragarritasun handia du, eta erreakzioa zuzenean probatu dezake Foregene Lysis sistema txantiloi gisa.Kit honek COVID-19 azido nukleikoa detektatzeko kit eta beste bakterio patogeno batzuk azido nukleikoak detektatzeko kit garatzeko eska dezake.
Deskribapena
Zuzeneko RT-qPCR Kit-ak RT-qPCR buffer bereizita paketatuta eskaintzen du (Foreasy HS Taq DNA polimerasa nahastuta) eta eraginkortasun handia eskaintzen du.Alderantzizko transkriptasa (MMLV),back-end kitak eta sistemaren doikuntzak sortzeko komenigarria da, egiaztapen sinplean.
RT-qPCR Kit zuzenak, Foregene-k garatzen duen Foreasy Reverse Transcriptase eta Foreasy HS Taq DNA polimerasa erabiliz, erreakzio buffer bereziarekin, kit hau erresistentzia eta bateragarritasun handia du, eta erreakzioa zuzenean probatu dezake Foregene Lysis sistema txantiloi gisa.Kit honek COVID-19 azido nukleikoa detektatzeko kit eta beste bakterio patogeno batzuk azido nukleikoak detektatzeko kit garatzeko eska dezake.
Kit hau zuzenean IVD produktuaren osagaia izan daiteke, erraz eta azkar erabiliz.Egiaztapen erraza besterik ez du behar, berriro garatu gabe.
Zehaztapenak
500T, 50.000T
Kitaren osagaiak
| Kitaren edukia (20 μL erreakzio-sistema) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Aurrez Ralderantzizko transkriptasa(200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| 2 × qPCR zuzenaMix-Taqman | 1 ml × 5 | 500 ml×1 |
| Instrukzioa | 1 | 1 |
Urrats operatiboak
A: Prestatu txantiloia eta erreaktiboa
1. Prestatu prestatutako RNA txantiloia (Foregene Total RNA Isolation Kit serieko kit-a erabiltzea gomendatzen da RNA txantiloia ateratzeko eta arazteko) edo laginak pitzatzeko produktua (Foregene Lysis sistema erabiltzea gomendatzen da), hasierako espezifikoak (10 μM) eta beste kontsumigarri garrantzitsuak, tresna.
2. Jarri 2× RT-qPCR Buffer zuzena, RNasarik gabeko ddH2O eta 20× ROX erreferentziako tindagaia (beharrezkoa bada) izotzdun kutxan, hauek modu naturalean urtu eta astiro-astiro nahastuz.
B: RT-qPCR sistema prestatzea
Lortu erreakzio-sistemaren erreakzio tamponaren bolumenaren erdia (adibidez, sistemaren bolumena 20 μL bada, 10 μL 2× RT-qPCR Buffer zuzena lortu behar du).). Izan eredagokion entzima kopurua, hori proposatzen duguM-MLV: 10-30 U/20 μL erreakzio-sistema,TaqDNA polimerasa:1-2 U/20 μL erreakzio-sistemahau da gure iradokizuna, probatu eta egokitu beharko zenuke), gehitu RNA txantiloia, abiarazle eta zunda espezifikoak eta gehitu RNaserik gabeko ddH2O 20 μL-ra.RT-qPCR erreakzio sistemaren prestaketa espezifikoa 1 taulara jo daiteke.
1. taula: RT-qPCR sistema prestatzea
| Osagaia | Bolumena | Azken kontzentrazioa |
| 2 × RT-qPCR Buffer zuzena | 10 μL | 1× |
| Alderantzizko transkriptasa (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerasa | 1-2 U | |
| Aurrerako lehen planoa (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Alderantzizko Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Zunda (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Txantiloia (RNA edo lisatua) | X μL | |
| 20× ROX Erreferentzia Tindagai | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Bolumen osoa | 20 μL |
Oharra: Forward Primer eta Reverse Primer helburu genearen abiarazle espezifikoak dira.qPCR-aren sistema esperimental eta PCR eredu praktikoen arabera doitu liteke.Primer gehienen azken kontzentraziorako 400 nM gomendatzen dugu.Egokitu lehen eta zunda espezifikoen bolumena prestatutako kontzentrazioaren eta gomendatutako azken kontzentrazioaren arabera, mesedez.
1*: Hautatu ROX Reference Dye-ren azken kontzentrazio egokia PCR tresna kuantitatibo ezberdinen arabera.PCR tresna kuantitatibo arrunten ROX Reference Dye kontzentrazio optimoa ondorengo taulan ageri da:
| PCR kuantitatiboko tresnak | ROX Reference Dye-ren azken kontzentrazioa |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Lehen urratsa,etab. | 1× (adibidez, gehitu 1μl 20×ROX Reference Dye 20 μL erreakzio sisteman) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P eta Mx4000, etab. | 0,5× (adibidez, gehitu 0,5 μl 20×ROX Erreferentzia Tindagai 20 μL erreakzio-sisteman) |
| Roche PCR tresna, Bio-Rad PCR tresna, Eppendorf PCR tresna kuantitatiboa, etab. | ROX Reference Dye gabe |
Biltegiratzea eta Iraupena
Kita -20 ± 5 ℃-tan gorde behar da.Berehala -20 ℃ hozkailu termostatikoan gorde behar da.Baliozko epea 2 urtekoa da, baldin eta egoera egokietan gordetzen bada.
